《細(xì)胞和分子免疫學(xué)》 三、激酶活性的測(cè)定

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中往往涉及多種激酶的活化，因而對(duì)這些激酶活性的測(cè)定可以作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究中的一種重要指標(biāo)。常見(jiàn)激酶活性的測(cè)定有PTK、PKC及PI-3K等。均有商品化的試劑盒。檢測(cè)原理是根據(jù)激酶可以催化特定底物發(fā)生磷酸化，外源加入32γ-ATP，通過(guò)分離反應(yīng)產(chǎn)物后測(cè)定放射活性，從標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出樣品酶的活性。前已提及，PKC從胞質(zhì)向胞膜的轉(zhuǎn)位是PKC活化的一個(gè)重要指標(biāo)，因而分離胞質(zhì)和胞膜中的PKC并分別測(cè)定其活性，計(jì)算胞膜上PKC活性占總PKC活性的比例，從而判定PKC的活化程度。