《中國生物制品規(guī)程》 枸櫞酸離子含量測定

1　試劑

1.1　標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉濃溶液

精確稱取枸櫞酸鈉(Na3C6H標(biāo)準(zhǔn)5O7·2H2O)0.5882g,加蒸餾水溶解，并準(zhǔn)確稀釋至100ml　，為20mmol/L　枸櫞酸鈉液。

1.2　標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液

精密量取標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉濃溶液5ml，用5%三氯醋酸準(zhǔn)確稀釋至50ml，為2mmol/L枸櫞酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液。

1.310%三氯醋酸：稱取三氯醋酸10g，用蒸餾水稀釋至100ml。

1.45%三氯醋酸：稱取三氯醋酸5g，用蒸餾水稀釋至100ml。

1.5　砒啶(A·R)。

1.6　醋酸酐(A·R)。

2　操作

2.1　樣品

精確量取0.5ml樣品，加　4.5ml　蒸餾水，加5ml10%三氯醋酸，混勻，置60℃水浴　5分鐘，離心去沉淀。精確量取1ml上清液于25ml玻塞試管中，加1.3ml吡啶，混勻，加5.7ml　醋酸酐，立即混勻并置于31℃水浴，準(zhǔn)確培育35分鐘后，于　425nm波長下測　OD值，同時(shí)做空白試驗(yàn)：取1ml　5%三氯醋酸代替1ml去蛋白后樣品上清液，其余操作同樣品。

2.2　標(biāo)準(zhǔn)曲線

精確量取標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液0.0、0.25、0.50、0.75、1.0ml,分別加5%三氯醋酸1.0、0.75、0.5、0.25、0.0ml?。ㄆ湎鄳?yīng)的枸櫞酸鈉離子含量為0、0.5、1.0、1.5、2.0mmol/l　），其余操作從加1.3ml吡啶開始同樣品。可得一標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3　計(jì)算

由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品稀釋液相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸離子Ammol/L。

樣品枸櫞酸離子含量(mmol/L)=A×20