《臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)》 第九章　人絨毛膜促性腺激素檢查

成熟女性因受精的卵子移動(dòng)到子宮腔內(nèi)著床后，形成胚胎，在發(fā)育成長(zhǎng)為胎兒過(guò)程中，胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生大量的人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,HCG），可通過(guò)孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中。當(dāng)妊娠1-2.5時(shí)，血清和尿中的HCG水平即可迅速升高，第8郛周達(dá)到高峰，至郛期第4個(gè)月始降至中等水平，并一直維持到妊娠末期。（圖9-1）

圖9-1 正常妊娠婦女血清中HCG平均值

HCG是由兩個(gè)非共價(jià)鍵相連的肽鏈組成的糖蛋白激素。其單個(gè)亞基不具有生物活性，當(dāng)連接成完整化合物時(shí)始具活性，分子量約為4.7萬(wàn)。其主要功能就是刺激黃體，有利于雌激素和黃體酮持續(xù)分泌，以促進(jìn)了宮蛻膜的形成，使胎盤生長(zhǎng)成熟。HCGα亞單位的氨基酸排列與黃體生長(zhǎng)激素（LH）α亞單位相似，故用完整的抗HCG分子的抗體測(cè)定HCG時(shí)與LH間有免疫交叉反應(yīng)。但它們的β亞單位各不相同。因此為避免交叉反應(yīng)，目前均采用高將近的抗β-HCG單克隆抗體進(jìn)持特異的HCG檢查，近年來(lái)還有報(bào)道采用抗β-HCG羧基末端肽單克隆抗體以進(jìn)一步提高檢測(cè)的敏感性和特異性。

（一）膠乳凝集抑制試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)

1960年Wide及Gemzell開始采用膠乳凝集抑制試驗(yàn)(latex agglutinationinhibitiontest,LAIT)技術(shù)測(cè)定尿中HCG，即將尿液與抗 HCG血清作用后，加入已吸附抗原的膠乳，如尿中含HCG較多，則先與抗 HCG結(jié)合，不再有多余的抗 HCG與膠乳產(chǎn)生凝集而仍呈均勻的乳膠狀，是為陽(yáng)性。相反，不含HCG尿不與抗血清作用，當(dāng)加入吸附抗原的膠乳后，抗血清可與膠乳抗原反應(yīng)，出現(xiàn)明顯的“特”特性凝集顆粒，即為陰性。也可利用血細(xì)胞的血凝抑制試驗(yàn)(hemoagglutinationinhibition test,HAIT)，其原理與膠乳法一致只是載體由膠乳改成羊紅細(xì)胞。這兩種試驗(yàn)方便簡(jiǎn)便，靈敏度為100-500Mu/ML，適合大批標(biāo)本檢查，但因特異性差，不能定量，已逐漸被單克隆抗體法所取代。

（二）放射免疫試驗(yàn)（RIA）

利用放射標(biāo)記的HCG與被檢測(cè)尿中的HCG競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合抗-HCG抗體，當(dāng)被檢尿中HCG增加時(shí)，結(jié)合物的放射性減低，與不同含量標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比可測(cè)尿中HCG的含量。使定量檢測(cè)成為可能。

由于RIA需一定設(shè)備，試驗(yàn)手續(xù)繁甭，且有核素污染問(wèn)題，不適用于臨床常規(guī)應(yīng)用。

（三）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

該方法目前已廣泛應(yīng)用于臨床，其基本原理是運(yùn)用夾心免疫酶分析技術(shù)。即采用HCG單克隆抗體包被于固相表面，樣品中的HCG都將與支持物表面的抗體相結(jié)合。與樣品一孵育后，沖洗耳恭聽(tīng)表面，然后加入特異性酶標(biāo)抗β-HCG亞基的單克隆抗體，最后加入酶作用的基質(zhì)，即產(chǎn)生顏色。該法可目測(cè)，靈感度為20-50Mu/ml,采用抗β-HCG單克隆抗體二點(diǎn)酶免疫法進(jìn)行定量，靈敏度可達(dá)2-10mU/ml。目前免疫酶法進(jìn)一步發(fā)展為更簡(jiǎn)便、適于病人自檢的一步法，即免疫酶滲透試驗(yàn)。

（四）單克隆抗體膠體金試驗(yàn)

免疫膠體金法是將羊抗人HCG抗血清（多抗）、羊鼠IGG分別固定特制的纖維素試帶上并呈兩條線上下排列，羊抗鼠IGG線在試帶知上方為陰性對(duì)照，羊抗人HCG多抗在下方為測(cè)定。試帶條中含均勻分布的膠體金標(biāo)記鼠抗人β-HCG單克隆抗體和無(wú)關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG。檢測(cè)時(shí)將試帶浸入被檢尿液中（液面低于固定的兩條抗體線）后迅速取出。尿液沿試帶上行，尿中的β-HCG在上行過(guò)程中與膠體金標(biāo)記單克隆抗體結(jié)合，待行至羊抗人HCG抗體線時(shí)，形成金標(biāo)記的β-HCG單元抗尿HCG羊抗人HCG復(fù)合物而在試帶上呈茲紅色區(qū)帶，為HCG陽(yáng)性反應(yīng)，試帶上無(wú)關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG隨尿液繼續(xù)上行至羊抗鼠IGG處時(shí)與之形成紫紅色的金標(biāo)記的抗原體復(fù)合物是為陰性對(duì)照。判斷結(jié)果時(shí)，含HCG的尿液試帶可顯示上、下兩條紫紅色線條，而陰性標(biāo)本則只顯出上邊一條紫紅色線。

[方法學(xué)評(píng)價(jià)] 縱觀HCG檢查方法，有生物激動(dòng)、化學(xué)法、免疫法等。幾種不同的HCG檢查方法比較見(jiàn)表9-1。免疫法的檢測(cè)手段不斷更新、向特異簡(jiǎn)便、快速、普及方向發(fā)展，現(xiàn)已有膠乳或血凝抑制試劑、放射免疫、酶免疫、膠體金紙片法等。除診斷早期妊娠早孕釘，HCG檢查對(duì)病理妊娠職宮外孕及胎盤滋養(yǎng)層疾病的診斷、鑒別、治療及追蹤觀察等均有意義。

表9-1 幾種檢查HCG方法的比較

妊娠試驗(yàn)名稱靈敏度（mU/ml或IU/L）實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)用價(jià)值雄蟾蜍（青蛙）試驗(yàn)（MT）3000需合格動(dòng)物、簡(jiǎn)便需4-12小時(shí)不能定量已淘汰膠乳凝集抑制試驗(yàn)（LAIT）100-500試劑易得、簡(jiǎn)便，5min完成一般早孕，敏感性低不能定量，少用紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HAIT）100-500試劑條件要求高2小時(shí)完成敏感性低，少用半定量放射免疫試驗(yàn)（RIA）