《實驗動物科學(xué)》 三、中醫(yī)證型動物模型在中國藥研究中的應(yīng)用

國內(nèi)早在1960年鄺氏等就指出皮質(zhì)素型動物（即醋酸氫化考的松模型、氨考模型或“陽虛”模型）一系列病態(tài)與陽虛臨床特征基本符合。1963年鄺氏等又觀察發(fā)現(xiàn)，助陽藥能減輕或糾正過量皮質(zhì)素引起的動物耗竭現(xiàn)象，并對助陽藥作用機(jī)理進(jìn)行探討，認(rèn)為助陽藥的作用并非單純促進(jìn)蛋白質(zhì)合成或補(bǔ)充了鉀或者替代腎上腺皮質(zhì)激素，其確切作用機(jī)理是否是糾正了機(jī)體“陽虛”本質(zhì)難以肯定尚待探討。1964年上海第二醫(yī)學(xué)院附屬廣慈醫(yī)院舌研究小組，為開展氣、陰虛舌象的動物實驗研究，以人工慢性貧血及高位小腸側(cè)瘺，造成“氣虛”和“陰虛”模型。1977年上海中醫(yī)學(xué)院正常人體學(xué)教研組，認(rèn)為助陽及滋陰藥能調(diào)節(jié)“陽虛”及“陰虛”現(xiàn)象，可反證造型的屬性。1980年施氏等首先采用電鏡技術(shù)觀察某些助陽藥對“陽虛”模型的肝細(xì)胞亞微結(jié)構(gòu)的作用，發(fā)現(xiàn)助陽藥能調(diào)節(jié)細(xì)胞核DNA復(fù)制及RNA、蛋白質(zhì)合成，改善細(xì)胞能量代謝；同年，北京師范大學(xué)生物系消化生理科研組在國內(nèi)首先報道用中藥大黃水浸煎劑造成“脾虛”模型，并用四君子湯反證。1981年陜西中醫(yī)學(xué)院生理教研室用改變植物神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能狀態(tài)的藥物建立類似“陽證”（阿托品）及“陰癥”（利血平）模型，并設(shè)想臨床“陽癥”和“陰證”的產(chǎn)生與交感、副交感神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能的盛、衰有關(guān)，同年，賁氏等以皮下注射乙酰苯肼（APH）造成實驗性溶血性貧血，擬“血虛”模型；同年，施氏等認(rèn)為“陽虛”模型，早期以“陰虛”為主，滋陰藥有一定作用，后期才以“陽虛”為主，助陽藥對之有顯著作用，說明中醫(yī)陰陽貫穿整個疾病過程。1982年施氏等又發(fā)現(xiàn)某些助陽藥對“陽虛”動物脾臟淋巴細(xì)胞有顯著保護(hù)作用；嚴(yán)氏等對“脾虛”動物的體表冷光、溫度及皮膚電阻、體重等多種體表物理信息的研究，發(fā)現(xiàn)體表冷光變化幅度最大，其次是體表溫度、體重，而體表電阻較差，并認(rèn)為這些指標(biāo)有方便、快速無損等優(yōu)點，是可取的；南京醫(yī)學(xué)院中西結(jié)合研究組，開展了脾虛泄瀉證的動物模型研究，認(rèn)為番瀉葉與大黃致瀉理作用基本一致，但其用量為大黃的1/10，主張番瀉葉可作為復(fù)制脾虛泄瀉證動物模型的首選藥物；張氏等認(rèn)為助陽藥能提高“陽虛”動物DNA合成率、降低死亡率；史氏等于家兔耳緣靜脈注入10%高分子右旋糖酐造成“血瘀”動物模型，并觀察川芎注射液治療作用；梁氏等用三聯(lián)疫苗及寒涼藥造成寒證，以溫?zé)崴幵斐蔁嶙C模型，觀察電刺激效應(yīng)；夏氏等模擬幾種常見的虛證病人，用不同方法同時建立四種（互相對立的兩組）病理模型，即甲狀腺功能亢進(jìn)（甲亢組）及減退（甲減組）；糖皮質(zhì)激素過多（氨考Ⅰ組）及腎上腺皮質(zhì)抑制（氨考Ⅱ組）等四組。然后用滋陰藥（生地、龜板）和助陽藥（附子、肉桂）進(jìn)行反證（即“診斷性治療”）區(qū)分證型。結(jié)果，甲亢組和氫考Ⅰ組服用滋陰藥有效（用助陽藥反惡化），辯證為陰虛為主；甲減組及氨考Ⅱ組服用助陽藥有改善（用滋陰藥惡化），故屬陽虛為主。上述情況與臨床所見基本一致。另外，兩組模型血漿中環(huán)核苷酸含量的變化與臨床結(jié)果亦一致。本實驗在方法學(xué)上進(jìn)行了一些改進(jìn)，采用了先注射β-腎上腺素激動劑（異丙基腎上腺素）或M-膽堿能激動劑（氨甲酰膽堿）引起血漿中cAMP和cGMP大幅度升高，然后取血測定cAMP、cGMP含量，且觀察cAMP、cGMP系統(tǒng)對相應(yīng)受體激動劑刺激的反應(yīng)強(qiáng)度。從而，不僅相對提高了測定方法的靈敏度，且比單純測定血漿中環(huán)核苷酸的含量，獲得更多的信息。1983年徐氏等觀察“陽虛”動物牙周變化及助陽藥作用；耿氏等觀察了助藥對“陽虛”模型免疫功能影響；熊氏等以大腸桿菌注入兔耳緣靜脈復(fù)制溫病衛(wèi)、氣、營血模型；胡、關(guān)氏等觀察大黃致虛模型的形態(tài)及免疫功能變化；黃氏等報道用100%的大黃、甘遂、大戟、芫花煎劑及100%的甘遂合劑（甘遂、芫花、大戟）喂飼小鼠未形成脾虛模型，而采用甘蘭加豬脂喂飼小鼠則成功；施氏等觀察到右歸丸（溫腎陽、補(bǔ)精血方劑）對“陽虛”動物肝細(xì)胞核亞微結(jié)構(gòu)有保護(hù)作用，楊氏等用外源性糖皮質(zhì)激素地塞米松灌胃造成下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)（HPA）軸受抑模型。1984年于氏等建立脾虛荷瘤動物模型為臨床健脾理氣法治療腫瘤獲得一定的啟示，馬氏等觀察到補(bǔ)骨脂注射劑能減輕因大劑量醋酸氫化考的松對肝細(xì)胞的損傷作用及使受氫考影響而下降的酶反應(yīng)上升；李氏等以反映上皮細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運系統(tǒng)各種性能的葡萄糖轉(zhuǎn)運電位（Transmural　Potential　Difference,PD）為指標(biāo)，觀察脾虛動物離體小腸不同環(huán)境下PD受抑，四君子湯有促進(jìn)恢復(fù)的作用；另外，汪氏等還發(fā)現(xiàn)小鼠氨考模型的腹膜細(xì)胞總數(shù)顯著減少，中藥（附子、肉桂、仙靈脾等）對其有調(diào)節(jié)保護(hù)作用。

國外，1971年日本有地滋為了解膈肌、肝臟病變與胸脅苦滿證的關(guān)系，在家兔身上進(jìn)行了以下實驗：①分別于左膈肌邊緣及中央，肝右葉被膜及肝右葉（作45°角）等部位刺入兩根粗0.5mm、長4mm的針并留針兩周。②皮下注射四氯化碳0.3ml（隔日1次注射4次；繼而隔5日1次共注射3次，同時每日胃內(nèi)注入柴胡浸膏顆粒5g,計10天）。③連日皮下注射苯肼（Phenyl　hydrazin）。④肝左葉注入10%氫氧化鈉及肝右注入10%鹽酸等。根據(jù)2周后檢查所見認(rèn)為，胸脅苦滿體征（捏診皮膚增厚、壓痛；觀察壓痛的方法是：將動物的四肢和頸部固定，捏診時軀干部跳起）與季肋部浮腫帶的病變相同，為同一體征。當(dāng)肝損傷嚴(yán)重及膈肌邊緣部發(fā)生病變時均出現(xiàn)胸脅苦滿證，而單味柴胡劑有防止出現(xiàn)該證的效應(yīng)。另外，還觀察到膈肌中央部位病變（出現(xiàn)于胸骨柄一帶），表現(xiàn)為梅核氣，而貧血引起的膈肌、肝臟等部位血流量減少時，不出現(xiàn)胸脅苦滿。1984年日本久保道德為研究傷寒論方劑的藥理作用而制作中醫(yī)“證”的動物模型；以病毒、細(xì)菌及致敏物質(zhì)（異性蛋白和多糖抗原）造成太陽病模型，并用桂枝湯反癥；以自身免疫性疾病--大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎當(dāng)作胸脅苦滿證的模型；抗原抗體反應(yīng)可導(dǎo)致轎小板聚集、血栓形成而誘發(fā)瘀血癥模型；大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎2個月后注入酪蛋白，再經(jīng)過2個月后出現(xiàn)陰證，八味丸對其有預(yù)防作用。