白癜風噬菌體抗體庫構建成功

近日，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院皮膚科劉玲碩士等在完成的一項國家自然科學基金資助課題中，采用細胞內PCR擴增抗體基因的方法，成功構建一庫容量為3×106白癜風的噬菌體抗體庫。該抗體庫的建立，為進一步研究自身抗體在白癜風發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其治療提供了嶄新的思路。

據(jù)介紹，白癜風是一種常見的皮膚色素脫失性疾病。近年來有研究表明，白癜風與自身免疫密切相關，其患者體內存在抗黑素細胞膜自身抗體，導致黑素細胞破壞，引起自身損傷。然而，對于“自身抗體在疾病發(fā)生發(fā)展中究竟是始動因素還是繼發(fā)反應”這一問題一直存在爭議。

為探討自身抗體機制的新思路，劉玲等研究人員采用細胞內PCR擴增的方法，選擇100例（男48例，女52例，平均年齡21歲，平均病程兩個月）進展期白癜風患者血樣，通過PCR1反轉錄、擴增輕鏈和重鏈可變區(qū)基因、Cre重組酶介導、單個細胞內輕重連接獲取體內原始配對信息，以及經振蕩篩選等系列技術處理后，成功地構建出一庫容量為3×106的白癜風噬菌體抗體庫。

該抗體庫經抗體表達、特異性檢測及吸附篩選等檢驗，結果顯示：細胞內PCR擴增ScFv基因，目的條帶為800bp，與預期大小相符；取20個單菌落提取質粒進行凝膠電泳，19個可見800bp目的條帶，重組率達95%。通過4輪“親和吸附-洗脫-擴增”篩選，特異性噬菌體抗體回收率增加約67倍，并獲得1株特異性針對黑素細胞膜抗原的抗體。提示抗體庫具有重組率高、特異性強、親和力好、抗體基因信息準確等特點。

研究人員認為，細胞內PCR技術，是一種全新的擴增抗體可變區(qū)基因方法，它在同一個載體上的輕鏈與重鏈的配對，不是人工隨機組合，而是在體內的原始配對，從人免疫細胞中擴增體內親本配對的單鏈抗體可變區(qū)基因，克隆到噬菌體載體，同時利用完整細胞篩選特異性針對黑素細胞膜抗原的自身抗體，從而得到編碼疾病相關抗體基因的準確信息。采用該技術能從分子水平上闡述自身抗體的產生機制、編碼基因規(guī)律及基因突變特點。