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根據(jù)抗體性質(zhì)和特異性不同可有以下幾種不同的平心法ILISA。
1.PcAb與McAb夾心法 用純化的多克隆抗體(PcAb)包被板子,加待檢細胞因子(或可溶性受體)和標準品,上層加酶標記的McAb。有時為了增加敏感性,上層加McAb后再用酶標記第二抗體顯色。
2.McAb與PcAb夾心法 用McAb包被板子,加待檢樣品,上層加酶標記的PcAb。有時為了增加敏感性,上層加PcAb后再用釗對PcAb的酶標記抗抗體。
3.雙McAb夾心法 選擇和應用識別同一個細胞因子(或受體)分子上不同表位的兩種McAb,其中一種包被板子,另一種McAb標記酶。由于單克隆抗體親和力識別表位地勻一,從質(zhì)量控制角度來看,一般比上兩種夾心法易控制。如目前已商品化檢測細胞因子(或其受體)的檢測盒大多采用雙單克隆抗體夾心法。
4.細胞、McAb夾心法 用表達IL-2R的MT-1細胞包被板子,加入待檢IL-2或標準品,上層加125I標記的McAb,根據(jù)γ計數(shù)cpm值推算出待檢IL-2含量。
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根據(jù)抗體性質(zhì)和特異性不同可有以下幾種不同的平心法ILISA。
1.PcAb與McAb夾心法 用純化的多克隆抗體(PcAb)包被板子,加待檢細胞因子(或可溶性受體)和標準品,上層加酶標記的McAb。有時為了增加敏感性,上層加McAb后再用酶標記第二抗體顯色。
2.McAb與PcAb夾心法 用McAb包被板子,加待檢樣品,上層加酶標記的PcAb。有時為了增加敏感性,上層加PcAb后再用釗對PcAb的酶標記抗抗體。
3.雙McAb夾心法 選擇和應用識別同一個細胞因子(或受體)分子上不同表位的兩種McAb,其中一種包被板子,另一種McAb標記酶。由于單克隆抗體親和力識別表位地勻一,從質(zhì)量控制角度來看,一般比上兩種夾心法易控制。如目前已商品化檢測細胞因子(或其受體)的檢測盒大多采用雙單克隆抗體夾心法。
4.細胞、McAb夾心法 用表達IL-2R的MT-1細胞包被板子,加入待檢IL-2或標準品,上層加125I標記的McAb,根據(jù)γ計數(shù)cpm值推算出待檢IL-2含量。