①穿孔素（perforin）:又稱成孔蛋白（pore-foming protein,PFP）、C9相關蛋白（C9 related protein）或溶細胞素（cytolysin），貯存于電子稠密胞漿顆粒（electron-densecytoplasmic granules），成熟的穿孔素分子由534個氨基酸殘基組成，分子量為56-75kDa，IP為6.4，穿孔素分子中央部位170-390之間的氨基酸序列與C9328-560氨酸酸序列約有20%同源性，這個區(qū)域與穿孔素和C9的多聚化和以管狀形式插入到細胞膜有關。在殺傷相時，CTL細胞脫顆粒，穿孔素從顆粒中釋放，在Ca2+存在下，插入靶細胞膜上，并多聚化形成管狀的多聚穿孔素（polyperforin），約含12-16個穿孔素分子，分子量可達1000kDa。多聚穿孔素在靶細胞膜上形成穿膜的管狀結構，內(nèi)徑平均16nm。這種異常的通道使Na+、水分進入靶細胞內(nèi)，K+及大分子物質（如蛋白質）從靶細胞內(nèi)流出，改變細胞滲透壓，最終導致細胞溶解。此過程與補體介導的溶細胞過程類似，溶解細胞過程比較迅速。CTL本身可能釋放A型硫酸軟骨素蛋白聚糖（proteoglycans of chondroitinsulphate A type）、硫酸軟骨素A限制因子（homologous restriction factor,HRF），因此可避免穿孔素對CTL自身細胞的攻擊。
(2)Ts細胞的亞群：Ts細胞還可分為Ts1、Ts2和Ts3不同亞群，分別起著誘導抑制、轉導抑制和發(fā)揮抑制效應的作用。它們之間相互作用的確切機理還不十分清楚，可能是通過釋放可溶性介質相互作用的。Ts1（Tsi，抗原特異性抑制性T細胞）分泌TsF1（TsiF，抑制誘導因子）→作用于Ts2（Tst，抑制轉導細胞），分泌TsF2（Tst F）→作用于Ts3（Tse，抑制效應細胞），分泌Ts3F（TseF），作用于Th細胞，通過對Th的抑制作用，從而對各種免疫功能起負調節(jié)作用。Ts細胞群具有高度異質性，除Ts1、Ts2、Ts3亞群外，還有一群反抑制性T細胞亞群（contra-suppressor T cel，Tcsl）。Tcs活化后分泌反抑制性T細胞因子TcsF，直接作用于Th細胞，解除Ts細胞的抑制作用，使Th細胞恢復輔助活性。
根據(jù)CD28陽性或陰性可將CD8+細胞分為細胞毒性T細胞（CD8+CD28+）和抑制性T細胞（CD28+CD28-）。CD28McAb能與60-80%T細胞發(fā)生反應，包括全部CD4細胞和部分CD8細胞。
1.Tc(CTL) 在人類CTL表型為CD3+CD4-8+CD28+。小鼠CTL表型為Thy-1+、Lyt-1+、Lyt-2+/Lyt-3+。
（1）CTL的分化：靜止的CTL以前體細胞（precursor）(CTL-P)形式存在，外來抗原進入機體被抗原提呈細胞（APC）加工處理，形成外來抗原與APC自身MHc I類抗原的復合物，被相應CTL克隆細胞膜表面TCR/CD3所識別，抗原刺激信號和APC釋放IL-1共同存在的條件下，CTL-p被活化，并表達IL-2R、IL-4R、IL-6R等多種細胞因子受體，在IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ等細胞因子誘導下，迅速增殖，并分化為成熟的效應殺傷性T細胞（effector CTL）。CTL具有識別抗原的特異性，即能殺傷具有特定的外來抗原（如病毒感染靶細胞膜表面的病毒抗原）與自身MHc I類抗原結合的復合物的靶細胞。有關CTL殺傷靶細胞受到MHC I類抗原的限制，參見第五章“主要組織相容性復合體”第四節(jié)。從腫瘤組織周圍分離獲得的CTL稱為腫瘤浸潤淋巴細胞（tumor infiltrating lymphocyte , TIL）。TIL在體外加IL-2培養(yǎng)后，具有很高的殺傷腫瘤作用，目前已用于臨床的腫瘤治療。
（2）CTL的識別機制：多種粘附分子參與CTL對靶細胞的識別和粘附，主要有：①LFA-1/ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3，可溶性ICAM-1（sICAM-1）可抑制CTL殺傷腫瘤細胞；②CD2/LFA-3（CD58），抗CD2McAb或抗CD58McAb均可抑制CTL效應細胞對靶細胞的殺傷；③CD8/MHcI類抗原的非多態(tài)性結構域。
（3）CTL的殺傷機制：TCL殺傷靶細胞的機理目前認為主要通過釋放多種的介質和因子介導的。
①穿孔素（perforin）:又稱成孔蛋白（pore-foming protein,PFP）、C9相關蛋白（C9 related protein）或溶細胞素（cytolysin），貯存于電子稠密胞漿顆粒（electron-densecytoplasmic granules），成熟的穿孔素分子由534個氨基酸殘基組成，分子量為56-75kDa，IP為6.4，穿孔素分子中央部位170-390之間的氨基酸序列與C9328-560氨酸酸序列約有20%同源性，這個區(qū)域與穿孔素和C9的多聚化和以管狀形式插入到細胞膜有關。在殺傷相時，CTL細胞脫顆粒，穿孔素從顆粒中釋放，在Ca2+存在下，插入靶細胞膜上，并多聚化形成管狀的多聚穿孔素（polyperforin），約含12-16個穿孔素分子，分子量可達1000kDa。多聚穿孔素在靶細胞膜上形成穿膜的管狀結構，內(nèi)徑平均16nm。這種異常的通道使Na+、水分進入靶細胞內(nèi)，K+及大分子物質（如蛋白質）從靶細胞內(nèi)流出，改變細胞滲透壓，最終導致細胞溶解。此過程與補體介導的溶細胞過程類似，溶解細胞過程比較迅速。CTL本身可能釋放A型硫酸軟骨素蛋白聚糖（proteoglycans of chondroitinsulphate A type）、硫酸軟骨素A限制因子（homologous restriction factor,HRF），因此可避免穿孔素對CTL自身細胞的攻擊。
圖7-3 CTL釋放穿孔素殺傷靶細胞機理示意圖
②絲氨酸酯酶（serine estersse）:活化CTL釋放多種絲氨酸酯酶，如CTLA-1（又稱CCP1或granzyme B）、CTLA-3（又稱H因子或granzyme A），其作用可能類似補體激活過程中的酯酶作用，通過活化穿孔素而促進殺傷作用。
③淋巴毒素（lymphotoxin,LT）:又稱腫瘤壞死因子-β（TNF-β），LT可直接殺傷靶細胞，但殺傷過程較慢，其殺傷機理參見第四章“細胞因子及其受體”第二節(jié)中腫瘤壞死因子。
2.Ts和Ts亞群 抑制性T細胞（suppressor T lymphocyte,Ts）對免疫應答有重要的負調節(jié)功能，抑制性T細胞功能的異常，常與T自身免疫性疾病、第I型超敏反應等疾病發(fā)生有關。
（1）抑制性T細胞的證實：綿羊紅細胞（sheep red blood cell , SRBC）對于小鼠是良好的免疫原，合適劑量的SRBC可誘導小鼠產(chǎn)生高效價的抗SRBC抗體。當過高劑量SRBC免疫小鼠時，則抗體合成水平反而明顯下降，稱為高劑量免疫耐受。動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，將高劑量免疫耐受小鼠脾細胞轉移到免疫原劑量刺激的小鼠體內(nèi)時，則小鼠抗體應答水平明顯下降。如高劑量免疫耐受小鼠脾細胞經(jīng)抗Thy-1和補體處理后再轉移到免疫原劑量免疫的小鼠體內(nèi)，則高劑量免疫耐受小鼠脾細胞的抑制作用消失。實驗證明了在高劑量免疫耐受小鼠的脾細胞中存在有抑制作用的T細胞。
表7-9 抑制性T細胞的證實
（1）免疫原劑量---→抗體應答+++SRBS免疫小鼠（2）高劑量SRBC---------------------------------→抗體應答+免疫耐受小鼠（3）高劑量免疫-→轉移未處理脾細胞-→免疫原劑量-→抗體應答+耐受小鼠 免疫小鼠（4）高劑量免疫-→轉移抗Thy-1+ ----→免疫原劑量-→抗體應答+++耐受小鼠 補體處理脾細胞 免疫小鼠進一步研究證明，這種抑制細胞的表型為CD3+CD4-CD8+（小鼠CD8單抗常用Lyt-2）。人的抑制性T細胞表型為CD3+CD4-CD8+CD28-。Ts細胞不僅對B細胞合成和分泌抗體有抑制作用，而且對Th輔助作用、遲發(fā)型超敏反應以及Tc介導的細胞毒作用都有負調節(jié)作用。
(2)Ts細胞的亞群：Ts細胞還可分為Ts1、Ts2和Ts3不同亞群，分別起著誘導抑制、轉導抑制和發(fā)揮抑制效應的作用。它們之間相互作用的確切機理還不十分清楚，可能是通過釋放可溶性介質相互作用的。Ts1（Tsi，抗原特異性抑制性T細胞）分泌TsF1（TsiF，抑制誘導因子）→作用于Ts2（Tst，抑制轉導細胞），分泌TsF2（Tst F）→作用于Ts3（Tse，抑制效應細胞），分泌Ts3F（TseF），作用于Th細胞，通過對Th的抑制作用，從而對各種免疫功能起負調節(jié)作用。Ts細胞群具有高度異質性，除Ts1、Ts2、Ts3亞群外，還有一群反抑制性T細胞亞群（contra-suppressor T cel，Tcsl）。Tcs活化后分泌反抑制性T細胞因子TcsF，直接作用于Th細胞，解除Ts細胞的抑制作用，使Th細胞恢復輔助活性。