各省、自治區(qū)、直轄市衛(wèi)生廳局、中醫(yī)藥管理局,新疆生產(chǎn)建設兵團衛(wèi)生局：
全國中醫(yī)藥特色社區(qū)衛(wèi)生服務示范區(qū)創(chuàng)建活動自2003年開展以來，各地積極開展社區(qū)中醫(yī)藥服務工作，取得了明顯的成效，積累了許多有益的經(jīng)驗。為指導各級衛(wèi)生、中醫(yī)藥行政管理部門、社區(qū)衛(wèi)生服務機構進一步深入開展社區(qū)中醫(yī)藥服務工作，我局對各示范區(qū)社區(qū)中醫(yī)藥服務工作規(guī)律性經(jīng)驗和規(guī)范性做法進行提煉、整理，起草制定了《社區(qū)中醫(yī)藥服務工作指南（試行）》?，F(xiàn)印發(fā)給你們，請結合各自實際情況，在工作中參考使用。在試行過程中有何意見和建議，請及時反饋國家中醫(yī)藥管理局醫(yī)政司。
聯(lián) 系 人：嚴華國 吳 迪
聯(lián)系電話：010-65914966 65930672（傳真）
二○○九年八月五日
本品系用各地區(qū)主要的鉤端螺旋體流行菌型，經(jīng)培育、殺菌后，按型別配成單價或多價菌苗，用于預防鉤映螺旋體病。
1 菌種
1.1 菌種來源
制造菌苗用之菌種，由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。疫情需要時，新分離的菌種經(jīng)與質量檢定部門會同檢定符合規(guī)程要求，并經(jīng)中國藥品生物制品檢定所同意后方可用于生產(chǎn)。
1.2 菌種檢定。
生產(chǎn)用的菌種應通過體重120～220g的豚鼠傳代，2～3天后或瀕死前抽取心血或摘取肝組織，接種生產(chǎn)用養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基，并培育傳至4代以上即可進行各項檢定。
1.2.1 培養(yǎng)特性
將上述菌種擱于生產(chǎn)培養(yǎng)基，接種量在5%以下，28～32℃培育5～10天，鉤端螺旋體菌數(shù)應達每視野100條/400x以上。培養(yǎng)物應透明，微帶乳光，搖動時稍有云霧狀混濁，菌形要求整齊，運動活潑，兩端形成鉤狀。
1.2.2 血清凝集反應
用3～10天的活培養(yǎng)物，每視野50～100條/400x，運動良好，且無自凝的鉤端螺旋體，與特異性血清做定量凝集反應，其凝集效價應達血清原效價之半。終點效價以菌數(shù)減少50%（++）為判定標準。新菌種要求用凝集素交叉吸收試驗法定型。
1.2.3 毒力試驗
用體重180～220g的健康豚鼠6只，分成兩組，弱毒、強毒株分別各皮下注射培育5～10天，每視野50～100條/400x活培養(yǎng)物2ml。弱毒株注射后48小時抽取心血，按1%量接種于生產(chǎn)培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基2支，培育14天，鏡檢。要求培育全部陽性，判為合格。強毒株注射后，觀察10天，至少應有2只豚鼠因患鉤端螺旋體病死亡，判為合格。
1.2.4 免疫力試驗
用培育5～10天每視野70～100條/400x經(jīng)56～58℃加溫1小時或0.3%(ml/ml)苯酚殺死的鉤端螺旋體培養(yǎng)物，以生理鹽水做3倍稀釋，免疫體重120～220g健康豚鼠3只（對照組3只應同時飼養(yǎng)），皮下免疫2次，第1次0.5ml，第2次1ml，間隔5天，末次注射后10～12天用同株或同型異株培育5～10天每視野50～100條/400x的培養(yǎng)物2ml進行皮下攻擊。
強毒株：攻擊后觀察10天，免疫組豚鼠應健存，外觀及食欲正常，不聳毛，運動活潑，體重增加，解剖無黃疸。對照組豚鼠至少應有2只患鉤端螺旋體病死亡，判為合格。
弱毒株：攻擊后，24小時抽取心血，接種2管5%～8%兔血清培養(yǎng)基，每管1～2滴（約為1%接種量）。培育14天。免疫組心血培養(yǎng)要求2/3以上為陰性，對照組均為陽性，判為合格。
1.2.5 抗原性試驗
用培育5～10天每視野70～100條/400x經(jīng)56℃加溫1小時殺死的培養(yǎng)物，靜脈免疫體重2.0～2.5kg的健康家兔3只，各按1ml、2ml與5ml，共注射3次，間隔5天，末次注射10～15天取家兔血清與同株培養(yǎng)物作凝集反應，至少應有2只家兔血清效價達到1∶10000以上判為合格。
1.3 菌各保存
1.3.1 鉤端螺旋體菌種應保存于含兔血清培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基內，存放在18～22℃暗處，定期傳代保存或液氮保存。
1.3.2 為保存菌種的毒力及純度，每傳3～6代，應通過體重120～220g健康豚鼠一次，并同時做血清學特性檢查。
2 菌苗制造
制造菌苗用的菌種每型可包括1～3株。
2.1 菌種
用體重120～220g的健康豚鼠，皮下注射培育5～10天生長良好的種子培養(yǎng)物2ml，注射后2～3天或瀕死前抽取心血或摘取肝組織，按1%以下量接種于生產(chǎn)用培養(yǎng)基或其他適宜的培養(yǎng)基，28～32℃培育7～18天，個別不易生長的菌種可延至30天，經(jīng)檢查為生長良好，運動活潑的純培養(yǎng)，方可用于大量接種。此外洗種法也可使用。液氮保存菌種復蘇后即可用于生產(chǎn)。
第1代菌種須做純菌試驗及血清學特性檢查。前5代接種量均不應超過10%。
制造菌苗所用之菌種不應低于4代（洗種法除外），最多不超過菌種檢定許可的代數(shù)（從感染動物或復蘇后接種第1代算起）。
2.2 培育
2.2.1 生產(chǎn)用培養(yǎng)基可用綜合或半綜合培養(yǎng)基。用10L大瓶或大罐通氣培養(yǎng)時，經(jīng)28～32℃培育5～14天，菌數(shù)應達300條/400x以上。取樣作純菌試驗及鏡檢，應無雜菌。培養(yǎng)物可用適當?shù)姆椒饪s。
2.2.2 培養(yǎng)物用苯酚或其他適宜殺菌劑殺菌。苯酚含量為0.25%～0.35%(g/ml)。
2.2.3 加苯酚的菌液于配合后，混勻，至少放置30分鐘，取樣鏡檢菌體滅活情況，測苯酚含量。
大瓶培養(yǎng)應逐瓶做無菌試驗。
2.3 菌苗配制
2.3.1 殺菌后，按預定比例將不同菌型培養(yǎng)物混合成1批。大罐培養(yǎng)亦可先合并后殺菌。若移至大瓶存放，應按前、中、后抽樣做無菌試驗。菌液如放置放半年以上。合并前應逐瓶重做無菌試驗。
2.3.2 菌苗所含菌型應按當?shù)刂饕餍芯团浜希?價以下（含5價）者，每型含菌數(shù)不低于1.5億條/ml，各型配合比例，不應超過或低于計算量的10%。六價以上菌苗，每型含菌數(shù)不應低于1億條/m.l，但菌苗的總菌數(shù)不應超過12.5億條/ml。
2.3.3 菌苗中應加氯化鈉，使其最后含量為0.75%～0.9%(g/ml)。
2.4 菌苗分批
同日合并的菌苗作為1批。大罐混合者，每罐作為1批，并按分裝機分為亞批。
2.5 分裝
分裝后按亞批抽樣，送質量檢定部門檢定。
3 成品檢定
3.1 物理化學檢查
應為微帶乳光的液體，不應變色，無異臭，無搖不散的凝塊及異物。PH值應為6.4～7.4。氯化鈉含量應為0.75%～0.9%（g/ml）。苯酚含量不超過0.25%～0.35%(g/ml)。
3.2 無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
3.3 安全試驗
3.3.1 防腐劑試驗
用體重18～20g健康小白鼠2只，各皮下注射0.5ml，注射后戰(zhàn)栗不得超過半小時，觀察7天，應活存。局部不得有膿腫或壞死。
3.3.2 毒性試驗
用體重18～20g之健康小白鼠5只，每只腹腔注射菌苗0.5ml，或用體重350～450g之健康豚鼠2只，腹腔注射菌苗0.5ml，觀察7日，應無死亡。
3.4 免疫力試驗
按成品菌苗所含菌型價數(shù)檢定，用生理鹽水將菌苗稀成每型含菌數(shù)0.5億條/ml。每生產(chǎn)年度生產(chǎn)前3批均勻應做免疫力試驗，以后每5批至少抽檢1批。試驗方法與判定標準同1.2.4項。
3.5 鑒別試驗
采用反向間接炭凝集試驗，按成品菌苗所含菌型價數(shù)與相應炭血清做炭凝集試驗，應產(chǎn)生特異性凝集。
4 保存與效期
應保存于2～8℃暗處，自殺菌之日起效期為1年半。