《中國生物制品規(guī)程》 凍干人凝血酶原復(fù)合物制造及檢定規(guī)程

本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血漿或血清，經(jīng)低溫乙醇法或衛(wèi)生部批準的其他適宜方法提制而得的凍干制劑，并經(jīng)病毒滅活處理。內(nèi)含凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ，主要治療Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子缺乏癥及對肝病或各種原因所致的凝血酶原時間延長而擬作外科手術(shù)等患者。

1　制造

1.1制造要求

1.1.1血漿應(yīng)無凝塊，無纖維蛋白析出，非脂血，無溶血。新鮮分離的液體血漿或冰凍血漿、去除冷沉淀以及凝血固子Ⅷ以后的血漿均可用于生產(chǎn)。血漿蛋白分離的組分Ⅲ沉淀存放時間最長不得超過半年。所用之血漿來源應(yīng)符合《原料血漿采集（單采血漿術(shù)）規(guī)程》。

1.1.2對制造工作室、設(shè)備及原材料的要求。

與《人血白蛋白（低溫乙醇法）制造及檢定規(guī)程》中1.1.3～1.1.4項要求相同。

1.2　制造工藝

1.2.1　可采用自血漿中直接凝膠吸附法或低溫乙醇和聚乙二醇（PEG，MW4000或6000）分離蛋白并經(jīng)DEAE葡萄糖凝膠A-50吸附法，亦可用經(jīng)衛(wèi)生部批準的其他適宜方法制備，并經(jīng)衛(wèi)生部批準的適宜方法進行病毒滅活處理。

1.2.2　穩(wěn)定劑

制品內(nèi)可加穩(wěn)定劑，若加肝素，按總效價即血漿當量單位（PE）數(shù)加入等單位的肝素注射液。

1.2.3　除菌過濾及分裝

本品宜采用薄膜過濾，直接分裝入無菌的成品瓶內(nèi)，每瓶裝量根據(jù)效價及成品規(guī)格確定。

1.2.4　凍干

除菌過濾分裝的制品經(jīng)外觀檢查后立即旋凍，并按《人血白蛋白（低溫乙醇法）制造及檢定規(guī)程》1.2.5項的規(guī)定進行凍干，但制品溫度不得超過35℃。

1.2.5　分批

同一制造工藝、同一容器混合的制品作為一批，不同濾品和不同機柜凍干的制品分為亞批。

1.3　半成品檢定

每批半成品應(yīng)進行效價測定及熱原質(zhì)試驗，并按亞批做無菌試驗。

1.4　成品規(guī)格

每瓶凝血酶原復(fù)合物的效價可有100、200、300、400、1000PE分鐘。

2　成品檢定

2.1抽樣

每批成品應(yīng)抽樣作全面質(zhì)量檢定。不同機柜凍干制品應(yīng)分別抽樣作無菌試驗及水分測定。

2.2　物理檢查

2.2.1　外觀

應(yīng)為白色或灰綠色疏松體，無融化亦象，溶解后應(yīng)為淡黃色或黃綠色澄明溶液，不應(yīng)有異物或沉淀。

2.2.2　真空度

以高頻火花真空測定器檢測，瓶內(nèi)應(yīng)出現(xiàn)藍紫色輝光。

2.2.3溶解時間

從冰箱取出制品，溫度應(yīng)先平衡至20～25℃，按瓶簽標示量加入適量20～25℃滅菌注射用水，使每ml含10PE。制品應(yīng)于15分鐘內(nèi)溶解。

2.3　化學(xué)檢定

按《生物制品化學(xué)檢定規(guī)程》進行。

2.3.1　水分

水分含量應(yīng)≤3%（g/g）。

2.3.2pH值

取2.2.3項下溶液在20±2℃測定，pH值應(yīng)為6.8～7.6。

2.3.3PEG含量測定

取2.2.3項下溶液測定，PEG含量應(yīng)≤0.05%（g/ml）。

2.3.4　鈉離子含量測定

鈉離子含量≤160mmol/L。

2.4　凝血酶活性測定

取2.2.3項下的溶液按附錄1進行測定。不得有凝塊或纖維蛋白析出。

2.5效價測定

取2.2.3項下的溶液按附錄2進行測定。每瓶效價應(yīng)不低于標示量的80%。

2.6HBsAg檢測

用敏感性為1ng/ml以下的試劑盒檢測，應(yīng)為陰性。

2.7抗HCV檢測

用敏感的方法檢測，應(yīng)為陰性。

2.8　抗HIV-1及2檢測

用敏感的方法檢測，應(yīng)為陰性。

2.9　無菌試驗

按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。

2.10　安全試驗

2.10.1豚鼠試驗

用體重300～400g健康豚鼠2只，每只腹腔注射檢品5ml（每ml含10PE），注射后半小時內(nèi)動物不應(yīng)有明顯的異常反應(yīng)，觀察7天，動物均健存，每只體重增加者判為合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠復(fù)試一次，判定標準同前。

2.10.2小白鼠試驗

用體重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射檢品0.5ml(每ml含10PE)，半小時內(nèi)動物不應(yīng)有明顯的異常反應(yīng)，繼續(xù)觀察7天，動物均健存，每只體重增加者判為合格。如不符合上述要求，用10只小白鼠復(fù)試一次，判定標準同前。

2.11　熱原質(zhì)試驗

按《生物制品熱原質(zhì)試驗規(guī)程》進行，注射劑量按家兔體重注射30PE/kg。判定標準按該規(guī)程4.2項要求進行。

2.12　鑒別試驗

用免疫雙擴散法，僅與抗人的血清產(chǎn)生沉淀線，與抗馬、抗牛血清不產(chǎn)生沉淀線。

2.13根據(jù)病毒滅活方法，必要時應(yīng)增加相應(yīng)檢定項目。

3　保存與效期

應(yīng)嚴格保存于10℃以下避光干燥處。效期自效價檢定合格之日起為2年。