《中國生物制品規(guī)程》 附錄　干擾素效價測定

采用CPE（細(xì)胞致病效應(yīng)）抑制為基礎(chǔ)的抑制微量測定法，以每ml干擾素檢品的最高稀釋度仍能保護(hù)半數(shù)細(xì)胞（50）免受病毒攻擊的稀釋度的倒數(shù)定為干擾素單位。以國際單位（IU）表示，并用國家標(biāo)準(zhǔn)品校正結(jié)果。

1　細(xì)胞培養(yǎng)

將新鮮傳代24～48小時的Wish細(xì)胞（人羊膜細(xì)胞）以約35萬/ml的濃度另入96孔組織培養(yǎng)板上，每孔100μl，置37℃5%CO2孵箱中培養(yǎng)4～6小時。

2　樣品稀釋與細(xì)胞混合

干擾素檢品做4倍系列稀釋，每份檢品做6個稀釋度（如100萬單位，則測4-12～4-7）每個稀釋度加2孔，與培養(yǎng)板中的細(xì)胞等量混合，置37℃5%CO25%CO2孵箱培養(yǎng)18～24小時。

3　加病毒

倒掉培養(yǎng)板中的上清液，以100CCID50/ml的濃度加入VSV（水泡性口腔炎病毒），每孔100μl，37℃5%CO2孵箱培養(yǎng)24小時左右。

4　觀察結(jié)果

顯微鏡下觀察細(xì)胞病變，若病毒對照各孔細(xì)胞出現(xiàn)75%～1000%的明顯病變和死亡（變圓、死亡、脫落（，而細(xì)胞對照組中的細(xì)胞仍生長良好（病變=0），則表明對照系統(tǒng)合格，結(jié)果成立。

5　計算

通常可按Reed?/FONT>Muench法計算，其步驟如下：

（1）計算保護(hù)百分比

稀釋度病變平均值（每孔）正常平均值（每孔）累積數(shù)比例百分比（%）病變正常正常/病變+正常4-141313/131004-2399/91004-312155/6834-422322/5404-547－－4-6411－－

（2）求出干擾素單位

距離比=（·高于50%的百分?jǐn)?shù)－50）/（高于50%的百分?jǐn)?shù)－低分50%百分?jǐn)?shù)）=（83－50）/（83－40）=33/43=0.77

即此批干擾素稀釋到4-3。77（1∶186）時能保護(hù)半數(shù)細(xì)胞免受攻擊病毒損害。此批干擾素效價為186單位，經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品修正，得出干擾素的國際單位（以IU表示）。