《中國生物制品規(guī)程》 人血白蛋白中辛酸鈉含量測定（氣相色譜法）

1　試劑

1.1　氯仿（A.R）

1.2　辛酸（CP）標(biāo)準(zhǔn)液

用氯仿配成10mg/ml溶液。

1.3　庚酸（CP）內(nèi)示液

用氯仿酸成10mg/ml溶液。

1.41.5mol/L高氯酸溶液

2　儀器

2.1　帶有積分儀及氫火焰檢測器的氣相色譜儀。

2.2　色譜柱

色譜柱為內(nèi)徑3mm，長2m的玻璃柱，內(nèi)裝涂有10%聚乙二醇（20M）固定液的ChromsorbVV擔(dān)體。

2.3　儀器工作條件

氣化室溫度230℃，柱溫190℃，載氣（純氮）流速40ml/分鐘；樣品，標(biāo)準(zhǔn)液注入量為2μl。

2.4　振蕩器

3　操作

3.1　標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取1.2項(xiàng)的辛酸標(biāo)準(zhǔn)液各10、20、30、40及50μl，分別與30μl.3項(xiàng)的庚酸內(nèi)標(biāo)液和4ml的氯仿組成5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管，混合均勻后，在通風(fēng)櫥中將氯仿?lián)]發(fā)至干，然后定量加入0.1ml氯仿溶解殘?jiān)?，上機(jī)測定。典型的色譜圖中內(nèi)標(biāo)庚酸的保留值為9分鐘左右，辛酸的保留值為13分鐘左右。分別以自動(dòng)積分儀顯示的各管樣品的辛酸和內(nèi)標(biāo)庚酸的峰面積之比，對各管中所含辛酸加入量進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì)，也可得到回歸方程。

3.2　樣品測定步驟

取已知蛋白濃度樣品，用蒸餾水稀釋至5%蛋白濃度，然后準(zhǔn)確取0.5ml，加入庚酸內(nèi)標(biāo)液30μl，1.5mol　/L高氯酸0.2ml，在振蕩器上混合均勻，然后加入氯仿4ml，加蓋，用振蕩器劇烈混合1分鐘，2800r/min離心10分鐘。用濾紙卷?xiàng)l小心吸去上層水，再用吸管小心吸出氯仿層，移入10ml管子中，在通風(fēng)櫥中待氯仿?lián)]發(fā)至干，精確加入0.1ml氯仿，溶解殘?jiān)?，上機(jī)測定。

4　計(jì)算

4.1　根據(jù)樣品測定時(shí)所得的辛酸與內(nèi)標(biāo)庚酸的峰面積比代入已得回歸方程，即得辛酸絕對含量。

白蛋白中辛酸量（mmol　/g蛋白）=測得辛酸絕對量（μg）/144.22×0.5×樣品蛋白濃度×100

注：

1.辛酸量（mmol）相等于辛酸鈉量（mmol）。

2.辛酸分子量為144.22。