《中國生物制品規(guī)程》 F（ab）2含量測定

1　試劑

1.1　丙烯酰胺溶液

取丙烯酰胺14g，雙丙烯酰胺0.367g，加蒸餾水至50ml。

1.2　緩沖液

Ph7.2，0.2mol　/L　PB-0.2%SDS：取NaH2PO4·2H2O17.8g,Na2HPQ4·12H2O103g,SDS4g，加蒸餾水至2000ml。

1.3　樣品結(jié)合液

取10%SDS4ml,0.2mol/L　PB0.2ml，甘油10ml，加蒸餾水至20ml。

1.4　電極緩沖液

取上述1.2項緩沖液稀釋1倍。

1.5　固定液

取甲醇400ml，冰醋酸70ml，加蒸餾水至1000ml。

1.6　染色液

取考馬斯亮藍2.5g，溶于500ml甲醇中，加冰醋酸70ml，再加蒸餾水至1000ml。

1.7　脫色液

取冰醋酸70ml，甲醇50ml，加蒸餾水至1000ml。

1.8　干燥液

取甘油30ml，甲醇200ml，加蒸餾水至1000ml。

2　操作

2.1　樣品處理

取一定蛋白質(zhì)濃度的樣品0.1ml，加樣品結(jié)合液0.1ml，100℃翥沸1～2分鐘，或37℃2小時，冷卻。

2.2　凝膠板制備

按下列比例制備所需量凝膠溶液∶0.2mol　/L　PB∶丙烯酰胺溶液∶水∶1.5%過硫酸銨=2∶1∶0.8∶0.25。最后加1～2滴四甲基乙二胺（TEMED），混勻后立即將膠液加入電泳槽的玻璃板間，要避免產(chǎn)生氣泡。

2.3　加樣

于每一樣品孔內(nèi)加入已經(jīng)處理過的樣品25μg蛋白。

2.4　電泳

電泳條件為每個樣品孔的電流恒定為2～3mA。當溴酚藍電泳至底部時停止電泳。

2.5　固定

將電泳后的膠板放入固定液中，過夜。

2.6　染色及脫色

于染色液中染色1～2小時，然后置脫色液中進行脫色，直至底色成為無色為止。

2.7　干燥保存

用適宜方法干燥。

3　結(jié)果計算

將干燥前或后的膠板用掃描儀于575nm或520nm處對每一樣品進行掃描，得出（或計算出）樣品中F（ab）2的百分含量。