北美黃連有效成分的提取分離與含量測(cè)定

北美黃連蓮Hydrastis canadensis又稱白毛莨，為多年生草本植物，原產(chǎn)于加拿大和美國(guó)東部地區(qū)。其干燥根與根莖入藥．根莖亮黃色，多節(jié)；莖黃色，有絨毛及平行而不規(guī)則的結(jié)節(jié)。該植物藥先后兩次被美國(guó)藥典收錄（1830年，1860～1926年），后來(lái)又被法國(guó)等13個(gè)國(guó)家藥典相繼收入。

1、化學(xué)成分及應(yīng)用概況

北美黃連的藥用價(jià)值主要由于高含量的異喹啉類生物堿，包括北美黃連堿（hydras tine）、小檗堿（berberine）、北美黃連次堿（hydrastinine）、坎那定（canadine）、canadaline等。此外還含有罌粟素、綠原酸、植物甾醇、樹脂、揮發(fā)油等成分。

北美黃連有抗菌消炎、收斂止血、愈傷、利膽的作用，在北美廣泛用于消除呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜炎癥。已開發(fā)出各種制劑，內(nèi)服可用于胃腸炎、胃酸過(guò)少、胃潰瘍、消化不良、上呼吸道感染、月經(jīng)過(guò)多和子宮頸出血；外用治療牛皮癬、痔瘡、鵝目瘡或創(chuàng)傷，洗液可用于陰道炎、白帶過(guò)多，含漱劑用于牙齦炎、口腔潰瘍，洗服液用于結(jié)膜炎等。

2、主要有效成分的分離精制

筆者根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，用適當(dāng)溶劑提取了北美黃連中的有效成分北美黃連堿和鹽酸小檗堿，并用住層析加以分離。

北美黃連干燥根莖粉碎，用乙醇加熱提取，提取物用氯仿回流，過(guò)濾。濾液回收氯仿，真空干燥．少量氛仿溶解，上硅膠拄，氯仿-甲醇梯度洗脫．TLC定性．合并與對(duì)照品北美黃連堿相同部位，回收溶劑，析出晶體。乙酸乙酯-乙烷重結(jié)晶，得無(wú)色片狀晶體I（mp130℃～132℃。濾渣干燥．95%乙醇-水（1：1）溶解．鹽酸調(diào)pH=2，放置析出黃色針狀結(jié)晶，乙醇-水重結(jié)晶，得晶體Ⅱ。

北美黃連干燥根莖粉碎，乙酸乙酯-乙烷混合溶劑回流提取，過(guò)濾．有機(jī)層水洗至中性，回收溶劑，固體物用無(wú)水乙醇、乙酸乙酯-乙烷多次重結(jié)晶，得晶體Ⅲ（mp130℃～132℃）。濾渣用95％乙醇回流提取，過(guò)濾，回收乙醇，加適量水，濃鹽酸調(diào)pH=2，放置析出黃色針晶，乙醇-水重結(jié)晶，得晶Ⅳ。

將晶Ⅰ、晶Ⅲ與北美黃連堿對(duì)照品點(diǎn)于GF254硅膠板上，氯仿-甲醇（97：3）展開。在紫外254nm。下出現(xiàn)同樣的紫色斑點(diǎn)（Rf 值為0.50），混合點(diǎn)樣也只有一個(gè)斑點(diǎn)。

用HPLC法精制，選用Hylperil ODS，柱；流動(dòng)相為3:7的乙腈與15％乙腈-85％0.01mol／mlSDS，流速0.8mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)300nm。晶Ⅰ、晶Ⅲ分別加人定量的北美黃連堿對(duì)照品；晶Ⅱ、晶Ⅳ分別加入定量的鹽酸小檗堿對(duì)照品混合進(jìn)樣，均只有一個(gè)峰，回收率均在99.0%～101.0％范圍內(nèi)。結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)認(rèn)為晶Ⅰ、晶Ⅱ是北美黃連堿；晶Ⅱ、晶Ⅳ是鹽酸小檗減。含量分析實(shí)驗(yàn)得北美黃連堿含量為99.60%，鹽酸小檗堿含量為99。1％。

文獻(xiàn)報(bào)道，采用乙醚-乙醇兩步提取法可直接從北美黃連中獲得北美黃連域及鹽酸小檗堿，但乙醚作提取溶媒難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。筆者選用乙酸乙酯作為主溶劑直接提取北美黃連堿，含量約為80％，多次重結(jié)晶后含量達(dá)98％。與文獻(xiàn)法比較，本實(shí)驗(yàn)方法有操作簡(jiǎn)單（直接提取2～3h，文獻(xiàn)法需26h），收率相近（直接提取1.6％，文獻(xiàn)為1.9％），純度高等特點(diǎn)。

3主要有效成分的含量測(cè)定

HPLC色譜條件與精制相同。北美黃連藥材粉末250mg置于索氏提取器中，用甲醇提取2h，甲醇定容至50mL容量瓶?jī)?nèi)，微孔德膜過(guò)濾即為供試液。0.2mg／mL的北美黃連堿對(duì)照品溶液與0.5mg／mL的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液及供試液各10μL分別進(jìn)樣，面積外標(biāo)法計(jì)算含量。

北美黃連堿與鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液按不同量進(jìn)樣，回歸方程分別為：Y=5.84×105+3440,r＝0.9816（北美黃連堿）；Y＝4.15×106＋3210，r=0.9913（鹽酸小檗堿）。

在回收率實(shí)驗(yàn)中，樣品中分別加人2000、4000和6000μg的北美黃連堿對(duì)照品，測(cè)出里分別為1960、3720和5860μg，平均回收率為96.22％，RSD為2.91％；樣品中分別加入2300、4600和6900μg的鹽酸小檗堿對(duì)照品，測(cè)出量分別為2220、4510和6630μg，平均回收率為96.88％，RSD為1.06％。

綜上所述，由于北美黃連在國(guó)外廣泛應(yīng)用，因而在我國(guó)也具有廣闊的生產(chǎn)與應(yīng)用前景。通過(guò)對(duì)其有效成分的分離與測(cè)定，希望對(duì)其深入研究起到一定的參考作用。