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近日,第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院臨床實驗科采用克隆技術,研究出一項“人端粒酶逆轉錄(hTERT)基因核心啟動子調控的人單純皰疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韋(HAS-tk/GCV)系統(tǒng)宮頸癌細胞(HeLa)特異性治療”新技術,該技術對體外HeLa具有明顯的殺傷作用。
據介紹,宮頸癌是一種死亡率較高的惡性腫瘤,傳統(tǒng)治療方法以手術、化療及放療為主,但患者生存率仍不理想。隨著分子生物學技術的發(fā)展,自殺基因療法在腫瘤治療中獲得了一定成功??蒲腥藛T已經證明,抑制端粒酶的活性能明顯抑制腫瘤生長,甚至迫使癌細胞自殺。hTERT基因在90%的人類腫瘤組織中呈過表達,具有明顯的腫瘤特異性。
為探討hTERT基因對HeLa特異性治療的新方法,研究人員采用克隆技術,構建hTERT基因啟動子調控的胸苷激酶基因(tk)真核表達載體pCI-neo/hTERT-tk,分別用脂質體法轉染HeLa和正常血管內皮細胞(ECV304),并通過克隆擴增后,用RT-PCR法檢測tk基因的表達情況,用流式細胞術檢測hTERT調控的HSV-tk/GCV系統(tǒng)對宮頸癌細胞及血管內皮細胞的殺傷作用。
檢測結果發(fā)現:在重組質粒pCI-neo/hTERT-tk中,出現與tk基因大小相符的約為1100bp的條帶;HeLa細胞轉染pCI-neo/hTERT-tk質粒后,可測到tk基因陽性表達,而正常的ECV304細胞轉染后則無tk細胞表達;HeLa細胞凋亡率為36.7%,ECV304細胞凋亡率為5.2%,兩組相比有顯著性差異(P<0.01)。同時,HeLa細胞S期所占比例為11.9%,而ECV304細胞S期所占比例高達32.7%(P<0.01)。提示hTERT在惡性腫瘤中陽性表達率高,在正常細胞中低表達或不表達。
研究人員認為,hTERT基因是決定端粒酶活性的重要組成部分,只有在端粒酶表達陽性的腫瘤細胞中,hTERT基因啟動子才發(fā)揮作用,使tk基因得到表達;同樣,只有在腫瘤細胞中得到表達的tk基因產生的tk酶,才可將更昔洛韋(GCV)轉化為細胞毒物,抑制DNA的合成和復制,導致細胞凋亡。同時,hTERT-tk基因在正常細胞中,無論是轉染前還是轉染后均無法引起明顯的細胞凋亡這一結果表明,hTERT-tk/GCV系統(tǒng)僅特異于腫瘤細胞,從而實現了腫瘤基因治療特異性這一根本目的。
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近日,第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院臨床實驗科采用克隆技術,研究出一項“人端粒酶逆轉錄(hTERT)基因核心啟動子調控的人單純皰疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韋(HAS-tk/GCV)系統(tǒng)宮頸癌細胞(HeLa)特異性治療”新技術,該技術對體外HeLa具有明顯的殺傷作用。
據介紹,宮頸癌是一種死亡率較高的惡性腫瘤,傳統(tǒng)治療方法以手術、化療及放療為主,但患者生存率仍不理想。隨著分子生物學技術的發(fā)展,自殺基因療法在腫瘤治療中獲得了一定成功??蒲腥藛T已經證明,抑制端粒酶的活性能明顯抑制腫瘤生長,甚至迫使癌細胞自殺。hTERT基因在90%的人類腫瘤組織中呈過表達,具有明顯的腫瘤特異性。
為探討hTERT基因對HeLa特異性治療的新方法,研究人員采用克隆技術,構建hTERT基因啟動子調控的胸苷激酶基因(tk)真核表達載體pCI-neo/hTERT-tk,分別用脂質體法轉染HeLa和正常血管內皮細胞(ECV304),并通過克隆擴增后,用RT-PCR法檢測tk基因的表達情況,用流式細胞術檢測hTERT調控的HSV-tk/GCV系統(tǒng)對宮頸癌細胞及血管內皮細胞的殺傷作用。
檢測結果發(fā)現:在重組質粒pCI-neo/hTERT-tk中,出現與tk基因大小相符的約為1100bp的條帶;HeLa細胞轉染pCI-neo/hTERT-tk質粒后,可測到tk基因陽性表達,而正常的ECV304細胞轉染后則無tk細胞表達;HeLa細胞凋亡率為36.7%,ECV304細胞凋亡率為5.2%,兩組相比有顯著性差異(P<0.01)。同時,HeLa細胞S期所占比例為11.9%,而ECV304細胞S期所占比例高達32.7%(P<0.01)。提示hTERT在惡性腫瘤中陽性表達率高,在正常細胞中低表達或不表達。
研究人員認為,hTERT基因是決定端粒酶活性的重要組成部分,只有在端粒酶表達陽性的腫瘤細胞中,hTERT基因啟動子才發(fā)揮作用,使tk基因得到表達;同樣,只有在腫瘤細胞中得到表達的tk基因產生的tk酶,才可將更昔洛韋(GCV)轉化為細胞毒物,抑制DNA的合成和復制,導致細胞凋亡。同時,hTERT-tk基因在正常細胞中,無論是轉染前還是轉染后均無法引起明顯的細胞凋亡這一結果表明,hTERT-tk/GCV系統(tǒng)僅特異于腫瘤細胞,從而實現了腫瘤基因治療特異性這一根本目的。