《醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基礎(chǔ)》 2．點(diǎn)突變型遺傳病的基因診斷2

（1）鐮形細(xì)胞性貧血的基因診斷：已知突變基因是編碼β珠蛋白鏈的第6位密碼子由GAG變?yōu)镚TG，從而使纈氨酸取代了甘氨酸，因此可用如下方法進(jìn)行診斷。

圖13－9 DMD基因缺失的多重PCR診斷

exon：外顯子；pm:啟動(dòng)子；1：正常9條帶；2：基因全缺失；3：?jiǎn)?dòng)子區(qū)缺失；4：第3外顯了缺失；5：第13外顯子缺失；6：第47外顯子缺失；7：47－52外顯子區(qū)段缺失；8：第52外顯子缺失

1）RFLP診斷：已知限制酶MstⅡ切割的識(shí)別順序是CCTNAGG，它能切割正常β鏈中CCTGAGG序列，但不能切割突變了的CCTGTGG（A→T）。這樣，由于突變消除了一個(gè)切點(diǎn)，使內(nèi)切酶長(zhǎng)度片段發(fā)生了改變，通過(guò)電泳，就可以區(qū)別正常的βA和βS（圖13－10）。

圖13－10 鐮狀貧血的基因診斷

除MstⅡ外，限制酶DdeⅠ（識(shí)別序列為CTNAG）也能夠把正常的βA基因與鐮變了的βS基因區(qū)別開(kāi)來(lái)，并用于診斷。

2）ASO探針診斷：由于突變部位和性質(zhì)已完全明了，也可以合成寡核苷酸探針，用32P標(biāo)化來(lái)進(jìn)行診斷。此時(shí)需要合成兩種探針，一種與正常βA基因序列完全一致，能與之穩(wěn)定地雜交；另一種與突變基因序列一致，能與βS基因穩(wěn)定雜交，但不能與正常的βA基因雜交。根據(jù)雜交結(jié)果，就可以把發(fā)生了突變的βS基因檢測(cè)出來(lái)。

PCR技術(shù)問(wèn)世以來(lái)，ASO診斷又有新的改進(jìn)，即先PCR擴(kuò)增長(zhǎng)約110bp的基因片段，然后再與ASO探針雜交。這樣可減少目的基因DNA用量，并降低與基因組DNA雜交時(shí)的非特異性信號(hào)。