《醫(yī)用化學(xué)》 二、比色分析的測(cè)量方法

無(wú)論是光電比色計(jì)還是分光亮度計(jì)，最常用的測(cè)量方法有如下兩種。

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)

先配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑顯色。選用合適波長(zhǎng)的入射光（光電比色計(jì)用濾光片，分光亮度計(jì)可轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器）。測(cè)定時(shí)先以空白溶液調(diào)節(jié)透光率100%，然后分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列的吸亮度。以吸亮度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線，叫做標(biāo)準(zhǔn)曲線（或稱工作曲線）。

例如，測(cè)定維生素B12時(shí)，可預(yù)先繪制維生素B12的A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖8-11），再用完全相同的方法和步驟測(cè)定被測(cè)溶液的吸亮度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出被測(cè)溶液的濃度或含量。

這種方法叫做標(biāo)準(zhǔn)蛐線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線可在固定儀器和方法的條件下多次使用，適合于經(jīng)常性工作。但若儀器不同或測(cè)定方法及條件改變，測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)曲線不同。因此在更換任何測(cè)定條件時(shí)都需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖8-11 維生素B12的標(biāo)準(zhǔn)曲線

（二）直接比較計(jì)算法

若僅對(duì)個(gè)別樣品進(jìn)行測(cè)定，且A-c曲線線性良好，可水作標(biāo)準(zhǔn)曲線而直接比較測(cè)定結(jié)果。

先配制一個(gè)被測(cè)物質(zhì)溶液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液，與被測(cè)溶液在相同條件下測(cè)定吸光度。根據(jù)下式可以計(jì)算。

A標(biāo)=K標(biāo)c標(biāo)b標(biāo)

A測(cè)=K測(cè)c測(cè)b測(cè)

由于使用同一波長(zhǎng)的入射光，采用同樣的比色皿，測(cè)定同樣的物質(zhì)。所以

K標(biāo)=K測(cè)

b標(biāo)=b測(cè)

因此A標(biāo)/A測(cè)=c標(biāo)/c測(cè)

則c測(cè)=A測(cè)/A標(biāo)×c標(biāo)