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銀杏葉中有效成分的提取
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摘 要
研究了從銀杏葉中提取總黃酮甙和萜內(nèi)酯等有效成分的4種方法，即(1)水提-醇沉-酯萃法；(2)丙酮-鹽水-提取法；(3)醇提-酯萃法；(4)乙醇提取-樹脂吸附法。其中方法(3)和(4)已經(jīng)中試，提取物總黃酮質(zhì)量分數(shù)分別為26.20%、31.62%。萜內(nèi)酯質(zhì)量分數(shù)為6%，達到德國同類產(chǎn)品質(zhì)量要求.
關(guān)鍵詞
銀杏葉；提??；總黃酮
我國是銀杏的故鄉(xiāng)，擁有世界70%以上的儲量，湖北、江蘇、江西，浙江、山東等省是我國銀杏主要產(chǎn)地。關(guān)于銀杏的藥用價值，我國古代就有記載。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明［1，2］，銀杏葉中的黃酮甙和萜內(nèi)酯，對心腦血管疾病有卓越的治療效果，對老年性癡呆也療效明顯。我國以銀杏提取物為原料制成的藥物制劑、保健食品、化妝品，行銷國內(nèi)外市場，年銷售額達到20～40億美元。
銀杏葉中含有多種成分，包括總黃酮甙類、萜類、烴基酚類，多烯醇類以及生物堿、糖、淀粉、蛋白質(zhì)和無機鹽。上述成分很多性質(zhì)相近，分離純化十分困難，國內(nèi)外均采取從銀杏葉中分離出總黃酮甙和總萜內(nèi)酯等有效成分，一般采用溶劑萃取、樹脂或活性炭吸附、沉淀分離等步驟。最近出現(xiàn)的超臨界萃取法是一很有發(fā)展前途的新方法。
筆者以湖北安陸的銀杏葉為原料，參考國內(nèi)外文獻［3～5］研究了4種提取方法：
(1)水提-醇沉-酯萃法；
(2)丙酮-鹽水-提取法；
(3)醇提-酯萃法；
(4)乙醇提取-
樹脂吸附法；對方法(3)、(4)進行了擴大試驗，提取物總黃酮甙質(zhì)量分數(shù)39.83%，萜內(nèi)酯≥6%，達到了德國Schwabe 公司生產(chǎn)的EGB761銀杏葉標(biāo)準(zhǔn)提取物的要求。
1 實驗部分
1.1 試驗原料及儀器
銀杏葉：產(chǎn)地湖北安陸（干葉）；樹脂：大孔樹脂D101、D201，天津南開大學(xué)附屬工廠生產(chǎn)；乙醇，乙酸乙酯均為工業(yè)級。
GILSON715型高效液相色譜儀，法國吉爾森公司；HP8452二極管陣列分光光度計，美國惠普公司。
1.2 實驗方法及步驟
1.2.1 醇提－酯萃法 稱取干銀杏碎葉200g，置于圓底燒瓶中，分別加入適量水、乙醇溶劑，回流2～3h，過濾，合并濾液用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器回收溶劑。溶劑回收率90%～95%，得濃縮浸膏，加入去離子水，冷凍除渣，重復(fù)3次，合并清液，用乙酸乙酯萃取，合并酯液，回收乙酸乙酯，得黃色粉狀產(chǎn)品，結(jié)果見表1之(3)。
1.2.2 醇提-樹脂吸附法 稱取干銀杏碎葉200g，加入質(zhì)量分數(shù)50%的乙醇在室溫下滲漏，過濾滲漏液，回收乙醇得棕色流膏71.7g，加入去離子水100ml，用石油醚（或乙醚）萃取2～3次，以除去葉綠素，用氨水調(diào)pH值至8～9，用去離子水調(diào)至一定濃度倒入樹脂柱中吸附、分離,用不同濃度的洗脫液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得黃色粉末2.5g；平均結(jié)果見表1之(4)。
表1 4種黃酮類提取方法的比較
2 結(jié)果與討論
2.1 結(jié)果比較
從表1結(jié)果發(fā)現(xiàn)，(3)、(4)方法產(chǎn)品外觀好，黃酮甙含量大于24%，而回收率大于1%，特別是(4)法，其黃酮甙含量可達31.62%。因此，選擇(3)、(4)法進行擴大實驗，以50kg干銀杏葉為原料能取得與小試驗相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。經(jīng)中國科學(xué)院上海藥物檢驗所檢驗，總黃酮達到了39.83%，其中萜內(nèi)酯質(zhì)量分數(shù)6%。
2.2 萃取劑濃度的影響
在(3)法中用不同質(zhì)量分數(shù)的乙醇進行萃取，結(jié)果見表2。試驗中乙醇的質(zhì)量分數(shù)太低提取不完全；乙醇質(zhì)量分數(shù)太高提取雜質(zhì)較多，分離純化難度大，產(chǎn)品中黃酮質(zhì)量分數(shù)低于24%，經(jīng)多次試驗選擇質(zhì)量分數(shù)70%乙醇為宜。
表2 乙醇質(zhì)量分數(shù)對提取物和回收率的影響
此外，在③法中，酯萃取之前用冷凍除渣效果較好，使酯萃過程中有效成分不易乳化，同時也可除去雜質(zhì)，有利于純化。
2.3 樹脂的選型
在(4)法中樹脂選型很關(guān)鍵，選用國產(chǎn)D101、D201均得到滿意結(jié)果。在進入樹脂吸附分離前，必須用石油醚或乙醚抽提葉綠素，葉綠素的存在會影響樹脂吸附容量及樹脂的再生。
3 結(jié) 語
實驗結(jié)果表明，用醇提酯萃法和醇提樹酯吸附法從銀杏葉中提取黃酮甙和萜內(nèi)酯是可行的，黃酮甙質(zhì)量分數(shù)分別為26.20%和31.62%，萜內(nèi)酯均為6%，達到了德國同類產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)。在保證質(zhì)量的前題下，如何提高提取物的收率仍是一有待深入研究的課題。