葉片離體培養(yǎng)有望實現(xiàn)藥用紫錐菊規(guī)?；嘀?/h1>

本報重慶訊 重慶郵電大學生物信息學院和重慶大學生物工程學院共同開展的重慶市科委自然科學基金項目“藥用紫錐菊(Echiancea purpurea)葉片離體培養(yǎng)技術(shù)”研究為實現(xiàn)藥用紫錐菊種苗工廠化快速繁殖提供了新途徑?？蒲腥藛T以藥用紫錐菊葉片為外植體，利用組織培養(yǎng)的方法誘導愈傷組織，成功地使其再分化形成完整植株。該研究建立的紫錐菊離體葉片的最佳培養(yǎng)條件可實現(xiàn)種苗快速生根，且生根率很高。此前利用藥用紫錐菊葉片進行組培技術(shù)的研究尚未見報道。

紫錐菊為多年生草本植物，其含有羥基酰胺、多糖、倍半萜、多炔類、咖啡酸衍生物、黃酮等多種活性成分。藥理研究顯示，原產(chǎn)于美洲的藥用紫錐菊對免疫功能有促進作用，可用于感染、感冒、關節(jié)炎、肺結(jié)核、氣管炎、扁桃體炎、濕疹等的治療。近年來，該植物受到國際上的普遍重視，成為國際市場需求量最大的植物藥之一。我國北京、沈陽、山東等地近兩年從歐洲和美洲成功引種該植物。但是，由于傳統(tǒng)的種子育苗繁殖方法存在種子采集困難、發(fā)芽率低、需要低溫春化處理工藝等問題，生產(chǎn)有較大難度，難以實現(xiàn)規(guī)模化，不能滿足日益增長的市場需求。因此，進行藥用紫錐菊的組培快繁再生技術(shù)研究非常必要。

在研究中，科研人員在藥用紫錐菊的種苗上采取較嫩的葉片，對其進行消毒處理后，將其接種到附加不同生長物質(zhì)的培養(yǎng)基中，誘導其生長。研究中選用的誘導培養(yǎng)基為MS+吲哚-3-丁酸（0.5~3.0毫克/升）+萘乙酸（0.5~2.0毫克/升）+蔗糖（30克/升）+瓊脂（7克/升）。增殖培養(yǎng)基為MS+吲哚-3-丁酸(0.2毫克/升)+6-芐基腺嘌呤（0.3~0.9毫克/升）+赤霉素(0.1~0.7毫克/升)+蔗糖（30克/升）+瓊脂（7克/升）。生根培養(yǎng)基為1/2MS+吲哚-3-丁酸(0.5毫克/升)+萘乙酸(0.1毫克/升)+蔗糖（30克/升）+瓊脂（7克/升）。培養(yǎng)溫度（24±2）℃，光照強度2500勒克斯左右，光照時間12~14小時/天。

在接種8天后，葉片切口周圍出現(xiàn)膨大致密的翠綠色愈傷組織。兩周后，愈傷組織不斷增殖，逐漸形成圓形顆粒狀突起。3周后，圓形突起形成綠色不定芽，繼而伸長形成小芽苗。平均每塊外植體可誘導5～11芽苗，且都在切塊的邊緣排列。培養(yǎng)25天后可形成具有肥綠葉片的小芽苗。

研究表明，不同激素濃度對植物愈傷組織的誘導分化和植株再生有重要影響。研究人員通過對培養(yǎng)基中施加不同濃度的萘乙酸和吲哚-3-丁酸檢驗對葉片愈傷組織的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥用紫錐菊的葉片適宜在MS+吲哚-3-丁酸(2毫克/升)+萘乙酸(1毫克/升)+蔗糖(30克/升)+瓊脂(7克/升)培養(yǎng)基上分化成苗。

在增殖培養(yǎng)中，待芽伸長并長出綠色葉片時，科研人員將苗分割成單株，將其轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上。20～25天后，小芽基部膨大，或增殖形成具有3～4個小芽的叢生芽，芽苗可長成3～5厘米的無根苗。一般30～35天繼代培養(yǎng)1次。在繼代培養(yǎng)中，需將大芽叢分割成小芽叢，剪去過長的葉片，或?qū)⑵浣臃N在新的增殖培養(yǎng)基上進行擴大繁殖，并適當增強光照強度，使苗生長健壯。不同的激素配比對叢生芽的出芽率有明顯的影響。要保持芽苗長勢良好，且分化出芽時不長愈傷組織，培養(yǎng)基應為MS+6-芐基腺嘌呤(0.7毫克/升)+赤霉素(0.5毫克/升)+吲哚-3-丁酸(0.2毫克/升)+蔗糖(30克/升)+瓊脂(7克/升)。

據(jù)介紹，紫錐菊的試管苗生根較為容易，即將高3厘米以上的無根苗切下，將其轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。12天時開始發(fā)根，25天后全部生根率達99％。根的數(shù)量為8～12條，最長約3厘米，平均長1.2厘米。激素對紫錐菊生根也有一定影響。當培養(yǎng)基為1/2MS+萘乙酸（0.1毫克/升）+吲哚-3-丁酸（0.5毫克/升）+蔗糖(30克/升)+瓊脂(7克/升)時，生根效果好，根系較發(fā)達。培養(yǎng)4周后，根數(shù)達8~12條，根長達3厘米左右。此時即可移栽。移栽前必須煉苗5~7天，即將苗取出，洗去附著在苗上的培養(yǎng)基，將其移栽到泥炭土及腐質(zhì)土混合的基質(zhì)中，并注意保溫、保濕。該方法的成活率可達90％。試管苗移栽3～4周后就可長出新根、新葉。成活后，可按常規(guī)進行栽培管理。

另外，研究人員還對葉片和葉柄不同部位的誘導分化和增殖能力進行了對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)葉片和葉柄越幼嫩，分化增殖能力越強；葉柄的分化主要出現(xiàn)在基部，數(shù)目較少，成苗速度快，芽苗健壯；葉片分化一般取中下部為宜，所誘導的不定芽數(shù)目多，成苗較慢，芽苗較弱。

（李標 唐坤 王伯初）