右旋紫草素和紫草素促進(jìn)大鼠肉芽組織增生的組織學(xué)研究

曾報(bào)道，紫草的醚提物能加速棉球誘導(dǎo)的肉芽組織增生。本次對(duì)右旋紫草素和紫草素促進(jìn)大鼠肉芽組織增生的作用進(jìn)行了組織學(xué)研究。

材料和方法：

①棉球誘導(dǎo)肉芽組織增生實(shí)驗(yàn)：右旋紫草素和紫草素分別溶于1%吐溫80。雄性Wistar大鼠體重約為250g，隨機(jī)分組。在乙醚麻醉下，背部皮膚消毒后做一切口，皮下植入一重約20.0±1.0mg的消毒棉球（其中右旋紫草素組及紫草素組棉球內(nèi)分別含0.1ml及0.3ml不同藥液，對(duì)照組僅植入一個(gè)內(nèi)含0.1ml吐溫的棉球）。分別于術(shù)后5d及10d取出棉球及肉芽組織，在60℃培養(yǎng)箱干燥24h，棉球重量比植入前增加的部分即肉芽組織干重。

②流式細(xì)胞儀分析淋巴細(xì)胞抗原表達(dá)：帶肉芽組織的棉球，在PBS中剪碎并通過300目篩去棉球碎片，離心并用氯化銨溶血，沖洗后與不同的熒光標(biāo)記抗體（結(jié)合R－PE的抗CD3抗體及結(jié)合FITC的抗CD11b抗體）室溫孵育30min。在流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上分析CD3⁺和CD11b⁺細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的百分比。

③組織學(xué)觀察：分別于術(shù)后5d及10d取出長有肉芽組織的棉球及其覆蓋的皮膚，固定，脫水，石蠟包埋，做到4μm厚的病理切片，再經(jīng)脫臘，0.3%過氧化氫甲醇封閉，分別與抗TGF-β抗體及抗α－平滑肌肌動(dòng)蛋白抗體孵育，用SABC法進(jìn)行免疫組化染色。

結(jié)果和討論：

①右旋紫草素和紫草素有促進(jìn)大鼠肉芽組織增生的作用。術(shù)后10d右旋紫草素和紫草素組的肉芽組織干重較對(duì)照組顯著增加，但兩種藥物之間無顯著性差異，術(shù)后5d各組肉芽組織干重?zé)o差異。

②兩種藥物都沒有增加肉芽組織中CD3⁺細(xì)胞數(shù)量，但術(shù)后10d兩個(gè)藥物組肉芽組織中CD11b⁺細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組明顯增加。

③右旋紫草素組和紫草素組術(shù)后5d皮下組織厚度都有增加，其中表達(dá)TGF－β的巨噬細(xì)胞和浸潤細(xì)胞增加，10d后浸潤細(xì)胞減少，成纖維細(xì)胞增加，可觀察到棉球周圍肉芽組織有膠原合成及再上皮化。另外術(shù)后5d細(xì)胞外α－平滑肌肌動(dòng)蛋白增加，肉芽組織周圍可見新生血管。研究表明，右旋紫草素和紫草素可促進(jìn)炎性細(xì)胞浸潤，新生毛細(xì)血管增加，成纖維細(xì)胞及膠原含量增加，從而促進(jìn)大鼠肉芽組織增生。