《醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基礎(chǔ)》 二、基因異常與診斷方法的選用

各種遺傳病的基因異常是不同的，同一遺傳病也可以有不同的基因異常，但這些異常大體可分為基因缺失和突變兩大類(lèi)型。后者包括單個(gè)堿基置換、微小缺失或插入。近年來(lái)不發(fā)現(xiàn)一些遺傳病是由于基因內(nèi)的三核苷酸重復(fù)順序增加引起的，根據(jù)對(duì)基因異常類(lèi)型的了解，可以采用不同的診斷方法（表13－2）。如基因缺失可用基因探針雜交，PCR擴(kuò)增直接檢測(cè)；點(diǎn)突變可用等位基因特異的ASO探針、SSCP等直接檢查。一般無(wú)需對(duì)家系成員進(jìn)行分析。但條件是必需知道基因異常的性質(zhì)，并肯定該異常與疾病之間的關(guān)系。然而，由于許多疾病的遺傳異質(zhì)性，以及多數(shù)遺傳的基因異常尚屬未知，目前能直接診斷的病種雖日益增多，但仍然是比較有限的。

表13－2 遺傳的基因診斷方法

基因異常方法探針、引物或限制酶基因缺失基因組DNA印跡雜交
PCR擴(kuò)增缺失基因的探針
引物包括缺失或在缺失部位內(nèi)點(diǎn)突變RFLP分析
ASO雜交
PCR產(chǎn)物的多態(tài)性分析
（RFLP、SSCP、DGGE）突變導(dǎo)致其切點(diǎn)消失的限制酶
正常和異常的ASO探針
引物包括突變部位基因已知但異常不明基因內(nèi)或旁側(cè)序列多態(tài)性（RFLP、AMP－FLP，SSCP）連鎖分析基因內(nèi)或旁側(cè)序列探針或引物基因未知與疾病連鎖的多態(tài)性，如SSCP、AMP－FLP連鎖分析，RFLP位點(diǎn)單體型連鎖分析與疾病連鎖的多態(tài)位點(diǎn)探針或引物

許多遺傳病的基因尚未分離克隆，或基因異常尚不清楚，因此還不能根據(jù)突變的性質(zhì)進(jìn)行診斷。但如果通過(guò)家系分析能證明某一DNA標(biāo)記（無(wú)論是等位基因還是多態(tài)性位點(diǎn)或片段）與致病基因連鎖，則凡帶有該標(biāo)記的成員都可能帶有致病基因，從而可作出間接的連鎖分析診斷。

應(yīng)用連鎖分析診斷時(shí)應(yīng)注意如下幾個(gè)問(wèn)題：①基因與DNA標(biāo)記之間可能發(fā)生重組。因此連鎖分析的準(zhǔn)確性取決于DNA與致病基因連鎖的緊密程度，連鎖愈緊密，可靠性愈高，故應(yīng)采用盡量靠近致病基因，即連鎖緊密的標(biāo)記，或采用多個(gè)遺傳標(biāo)記以盡可能排除重組。由于可能存在重組，連鎖分析不能完全確定致病基因是否存在，而是指出存在可能性或概率的大小。如果標(biāo)記距基因有5cM，即重組率為5％，則作出診斷時(shí)尚有5％誤差的可能，即只有95％的把握作出肯定或否定的結(jié)論。②選用的遺傳標(biāo)記在人群中的雜合度。如果標(biāo)記的雜合度在人群中很低，即多數(shù)個(gè)體為純合子，則這種標(biāo)記用處不大。因?yàn)槿缂蚁抵嘘P(guān)鍵成員不能提供致病基因在哪一條染色體上的信息，常使連鎖分析無(wú)法進(jìn)行，因此需選用人群中雜合度高的標(biāo)記。③在連鎖分析時(shí)，有時(shí)只分析一個(gè)多態(tài)位點(diǎn)還不能把某一家系中帶有致病基因的染色體與正常染色體區(qū)分開(kāi)來(lái)。這通常是由于關(guān)鍵成員如待診者的父母是純合子，不能提供必要的信息，這時(shí)可同時(shí)分析更多的多態(tài)位點(diǎn)，即作單倍型（haplotype）分析。單倍型是指一條染色體上兩個(gè)或兩個(gè)以上多態(tài)位點(diǎn)的狀態(tài)的組合。兩條染色體多個(gè)位點(diǎn)上都純合的概率畢竟是很小的，因此單倍型有助于區(qū)分兩條常染色體，并追蹤致病基因的分離情況。