《實驗動物科學(xué)》 四、裸鼠的繁殖和飼料條件

（一）繁殖

目前繁殖裸鼠不用nu/nu雌鼠，因其繁殖性能低，一般采用雜合子交配方式或隱性純合子雄性與雜合子雌鼠交配。這種交配方法，其后代將出現(xiàn)表現(xiàn)型正常的仔鼠和裸鼠，比例為1：1。

繁殖時一般將nu基因?qū)隒57BL/10小鼠中。在把基因?qū)胪矗–ogenic）品系時，一般用雌性C57BL/10與雄性C57BL/10-nu（遠(yuǎn)交株）雜交。其交配方法和結(jié)果如下：

北京藥品檢定所繁殖裸鼠用的鼠種是BALB/C-nu/nu，系1973年從丹麥引入日本中央實驗動物所研究。繼續(xù)培育三年后，交由日本CLEA株式會社進行生產(chǎn)。1980年由CLEA引入。雄鼠是無胸腺裸鼠（BALB/C-nu/nu），雌鼠是有胸腺的雜合小鼠（BALB/C-nu/+）。采用BALB/C-nu/+♀與BALB/C-nu/nu♂隨機交配法進行繁殖，已取得較好成果，裸鼠的生產(chǎn)性能良好：受胎率達81.5%，平均產(chǎn)仔率8.1只/窩，平均產(chǎn)裸仔率3.99只/窩，窩平均仔鼠成活3.62只，9周齡仔鼠成活率100%，其主要項目數(shù)據(jù)與日本中央實驗動物研究所（CLEA）和英國實驗動物中心（LAC）發(fā)表的材料基本一致。

（二）飼料條件

因為裸鼠缺乏T細(xì)胞，易受細(xì)菌、病毒和霉菌感染的損害，如按常規(guī)動物方式飼養(yǎng)，只有少數(shù)裸鼠能生存一個月以上，最多不超過四個月，而放在隔離器（Isolator）中飼料的可存活一年以上。因此，裸鼠的壽命與飼料的衛(wèi)生條件有密切的關(guān)系。一般是先在隔離器中繁殖。然后放入無特定病原體屏障環(huán)境中飼料。

無病原體條件的飼料需要在動物和外界之間裝置一個屏障，屏障越嚴(yán)，飼料健康裸鼠就越有保證，然而，如不注意選擇屏障的類型，它的效果就沒有保證，故應(yīng)持續(xù)檢查是否符合條件。

1．無病原條件飼料裸鼠設(shè)備

⑴帶有密封空氣過濾裝置的塑料籠。每一籠自為一個單元。它包括一個標(biāo)準(zhǔn)的透明塑料籠，籠蓋上覆有空氣過濾材料。后者與籠子的貼近處用膠帶纏繞數(shù)周予以密封。然后，此籠可置于一般實驗室的標(biāo)準(zhǔn)籠架上。過濾材料呈片狀，由疏紡的（但非紡織的）聚酯纖維制成。它應(yīng)該能夠防止微生物從籠外進入籠內(nèi)。

全套籠具皆經(jīng)高壓蒸汽滅菌。使用它和喂養(yǎng)管理（如加飲水和飼料、清籠、斷奶等）時，都必須在一個防護罩內(nèi)進行。罩內(nèi)所含有的是正壓過濾空氣。而且還是層流（無湍流的）、單向的。

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為了最有效的控制環(huán)境，從而得以盡力保存無菌的（或帶有一定菌群）裸體小鼠，隔離器是理想的存養(yǎng)設(shè)備。但它也有缺點，這就是費勞力，在一定空間中繁育動物的數(shù)量有限。

⑶空氣層流器。它包括標(biāo)準(zhǔn)的小室，覆罩和網(wǎng)架。每套器具形成一個獨立的環(huán)境，與室內(nèi)通風(fēng)系統(tǒng)無關(guān)。它自己輸入過濾空氣，把超凈空氣完滿地注入鼠籠，并以柱狀排出。由于每套器具互不相干，又有正壓空氣防護，所以可把它們放在通常條件下。它們是手提式的，既便于維修，又能最大限度地利用房舍和設(shè)備。

使用此種方法是否成功，取決于管理工作的好壞。密切監(jiān)視房室的污染和人員流動，只準(zhǔn)專職人員入室。應(yīng)當(dāng)在正壓、單向氣流條件下料理維修鼠籠，接觸小鼠的一切物品（飼料和其它物品）都必須滅菌。飲水須經(jīng)處理除去細(xì)菌，專職工作者須穿戴無菌的外科口罩、帽子、手套和后長衣，觸及動物時須用頭端包有橡皮的鑷子，而且必須經(jīng)變性乙醇（就放在一邊）的浸洗。

⑷空氣層流室。有別于上述的一個房間內(nèi)放置的小型空氣層流器，而是整個房間的環(huán)境都為正壓過濾空氣所籠罩。設(shè)計時，須裝置空氣進入的開關(guān)，空氣入口要裝指示器。工作人員在室內(nèi)的穿戴同上所述。室內(nèi)應(yīng)用的飼料、墊料和籠具的滅菌，須用兩端有開關(guān)的高壓蒸氣滅菌器。

引種方法可最大限度地利用房舍以繁育動物。雖然裝設(shè)此種房間

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掌寫笥?.3μm的顆粒?？諝獬隹谝灿羞^濾裝置（也可以用效能上較低的）以防止空氣倒流時的污染，而且要先設(shè)計好怎樣從室外維修這些過濾器。

在空氣層流室內(nèi)，空氣的正壓至少為0.65cmH2O?？諝獾牧飨蚝退俣纫刂频镁鶆蚨杂?。過濾的空氣連續(xù)掠過鼠籠時，奔流于動物環(huán)境之中，在理論是一個防止外源性污染的屏障。

⑷光照。每日應(yīng)當(dāng)維持10小時光照，14小時無光的明暗周期。不用窗戶，用人工照明，使全年光照恒定，但應(yīng)避免過強的熒光燈光照。

3．籠具和墊料

培育裸體小鼠的籠具，籠底面積應(yīng)當(dāng)為97平方厘米（15平方吋），高度應(yīng)為12.7厘米（5吋），應(yīng)選可耐受高壓蒸氣滅菌的塑料或不銹鋼制作。其造型應(yīng)當(dāng)便于重疊，以利滅菌和存貯。透明塑料籠較好，用時不必打開籠蓋就要觀察動物?；\底要放墊料，不能用網(wǎng)。

籠子必須每周清潔一次，或視需要處理，以保證環(huán)境清潔、干燥。用去污劑或其它洗滌劑清洗后的籠子或其它物品，必須充分沖洗干凈。否則，會刺激裸體小鼠的皮膚。

墊料直接接觸裸體小鼠的皮膚，不能帶有刺激性。可選用不帶塵土和尖塊的硬木屑，研磨過的玉米桿，或用松木刨花。用前都要滅菌，且滅菌后不結(jié)成塊狀才可使用。

為裸體小鼠建巢可用棉花或棉紙。但是，如果墊料有一

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力不得超過10磅。維生素混合液及水應(yīng)適當(dāng)?shù)剡M行某些細(xì)菌培養(yǎng)的檢查，并應(yīng)隔天更換水瓶，水瓶和飲水管在兩次使用之間必須洗滌和消毒。

通過飲水供給抗菌素，可消除胃腸道的細(xì)菌（Van　Der　Waaij氏，1966）。并且，這也是一個防止裸體小鼠在嚴(yán)格的環(huán)境控制下可能發(fā)生的外源污染的附加措施。我們使用的四種配方如表4-4所示。下列抗菌素很少消化道吸收，每一種配方應(yīng)每周更換一次，每四周輪換一遍，可減少抗藥菌株的出現(xiàn)。

假如你一開始就在嚴(yán)格控制的環(huán)境中繁育無菌裸體小鼠，則也可以不必使用抗菌素，因為加用抗生素后在繁育技術(shù)上出現(xiàn)差錯的可能性也就增加了。

表4－4　裸體小鼠飲水中所用抗菌素的種類和用法

時　間（周）抗　菌　素用　量1桿菌肽4克/升新霉素4克/升2抗敵素250毫克/升土霉素500毫克/升3桿菌肽1克/升鏈霉素1克/升4抗敵素250毫克/升土霉素500毫克/升氨芐表霉素500毫克/升

5．空氣層流室的保養(yǎng)

層流室內(nèi)從地面到天花板以及設(shè)備均需保持無塵和無破碎。每月必須檢測室內(nèi)的無菌情況，每平方米放一個平皿，檢查室內(nèi)空氣中的細(xì)菌數(shù)量。落下菌的檢查各國規(guī)定不同，見下表

表4－5　各國層流室落下菌限度的規(guī)定

規(guī)定單位平甲培養(yǎng)基暴露時間（分）培養(yǎng)時間、溫度落下菌限度日　本普通瓊脂5′37℃　48hr