《中國生物制品規(guī)程》 附錄　抗-HBs效價測定（RIA法）

1　試劑

1.1　用（人）HBsAg（亞型ad,ay）包被的聚乙烯珠子。

1.2　125I標記的（人）HBsAg（亞型ad,ay）試液。

1.30.01mol/L　Tris緩沖液，內(nèi)含4%牛血清白蛋白，pH7.4。

1.4　抗-HBs參比標準品，含抗-HBs10～160mIU　/ml。采用四點法　或五點法。

2　測定

先將檢品按估計效價稀釋成不同倍數(shù)，使其cpm計數(shù)落在參比標準品直線范圍內(nèi)。一般10%肌注丙種球蛋白可進行10、20、40倍稀釋。乙型肝炎免疫球蛋白可進行500、1000、2000倍稀釋。正式試驗時根據(jù)預試結(jié)果調(diào)整稀釋倍數(shù)。預試驗用3個稀釋倍數(shù)，正式試驗用2個稀釋倍數(shù)。

2.1　各取0.2ml參比標準品及不同稀釋倍數(shù)的檢品，加入反應(yīng)盤的不同孔中。預試驗時每個稀釋倍數(shù)檢品加1孔，正式試驗每個稀釋倍數(shù)檢品加3孔。于每孔中小心加入一個HBsAg包被珠子，蓋上密封膠紙，振蕩或輕拍反應(yīng)盤，排出氣泡，并使珠子全部浸入液體中，置室溫（15～30℃）結(jié)合18小時（16～20小時）。

2.2　去除膠紙，吸出孔內(nèi)液體，每珠用4～5ml蒸餾水洗3次，最后一次盡量將水吸干。

2.3　于每孔中加0.2ml125I標記HBsAg試液，輕拍反應(yīng)盤，排出氣泡，并使珠子全部浸入液體中，蓋上新的密封膠紙，置室溫結(jié)合4小時（或45℃水浴2小時），去除膠紙，按2.2項沖洗。

2.4　用紙試管架將珠子從反應(yīng)盤轉(zhuǎn)移至塑料管中，其編號應(yīng)與反應(yīng)盤孔號一致。將反應(yīng)管置適宜的井型γ計數(shù)器中計數(shù)cpm，洗后24小時內(nèi)均可使用。

3　計算

3.1　先救求出參比標準品和各稀釋倍數(shù)檢品的平均cpm計數(shù)，以參比標準品抗-HBsmIu　/ml為橫座標，以cpm計數(shù)為縱座標在座標紙上作圖，連接各點成一直線。

3.2　從標準直線上查出各稀釋倍數(shù)檢品的cpm計數(shù)點，并從此點向下作一垂直線，在橫座標上查出抗-HBs　mIU，再乘以檢品稀釋倍數(shù)，除以1000，求出2點或3點的平均值即為該檢品的抗-HBs　IU/ml。

4　注意事項

4.1　預試驗時應(yīng)按試劑盒要求做陽性和陰性對照。

4.2　冰箱保存的試劑，用前應(yīng)先于室溫內(nèi)放置1小時。

4.3使用不能自動減本底的γ計數(shù)器時，應(yīng)減本底后再計算。

4.4　所有測定操作應(yīng)遵守同位素實驗室安全防護制度。