《細(xì)胞和分子免疫學(xué)》 （二）免疫細(xì)胞上的受體分布

運(yùn)用藥理學(xué)方法、放射受體分析、放射自顯影、受體生化和受體分子生物學(xué)等技術(shù)，已在免疫細(xì)胞膜上或胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)眾多激素、神經(jīng)肽和神經(jīng)遞質(zhì)的特異性受體。

1.經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)受體

（1）腎上腺素受體：腎上腺素能受體可分為α和β兩型，并可再分為α1、α2和β1及β2型。已知胸腺和脾接受腎上腺素能纖維的支配，并發(fā)現(xiàn)在胸腺細(xì)胞和脾細(xì)胞膜上有β受體的分布。小鼠胸腺細(xì)胞β受體在胚胎期的親和力（Kd=2.2nM）高于成年鼠（Kd=8.0nM）。用β受體激動(dòng)劑異丙腎上腺素刺激后，胎鼠胸腺細(xì)胞cAMP增高也更為明顯。小鼠淋巴細(xì)胞上β受體的Kd為1nM，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)為500個(gè)/細(xì)胞。另有報(bào)道，用125I標(biāo)記的受體拮抗劑進(jìn)行受體分析表明，小鼠淋巴細(xì)胞上受體為β2亞型，其Kd=0.9nM，受體密度為3000個(gè)/細(xì)胞。用24株近交系小鼠進(jìn)行的受體分析表明，T和B細(xì)胞上β2受體動(dòng)力學(xué)參數(shù)基本相同，亦不受性別影響。

大鼠腹腔肥大細(xì)胞膜上有β受本分布，Kd為1.58±0.56nM，結(jié)合容量為4000±14000個(gè)/細(xì)胞，藥理學(xué)分析表明，這些β受體中83.5%為β2，而16.5%為β1亞型，且用IgE致敏或相關(guān)Ag刺激肥大細(xì)胞均不改變?chǔ)率荏w的特性。靜止的肥大細(xì)胞以β受體激動(dòng)劑刺激15秒，胞內(nèi)cAMP即有明顯的增多，但不影響IgE介導(dǎo)的組織胺的釋放。年輕大鼠的脾實(shí)質(zhì)細(xì)胞有β2和β2受體的共存。

家兔外周血淋巴細(xì)胞的β受體密度為3500左右/細(xì)胞，其Kd為0.35±0.18nM。

人外周血淋巴細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及血小板上均有腎上腺素能受體。正常人和哮喘患者淋巴細(xì)胞上β受體密度有異，而受體親和力不變，服用β受體激動(dòng)劑可降低β受體密度，呈下調(diào)現(xiàn)象。正常自愿受試者每天服用terbutaline 6mg，7天后淋巴細(xì)胞上β2受體數(shù)目減少42%。T和B淋巴細(xì)胞的受體參數(shù)無(wú)明顯差異。血小板上有α腎上腺素能受體，刺激其受體可促進(jìn)血小板聚集。人多形核白細(xì)胞及Mφ上有α2受體的存在。另?yè)?jù)新近報(bào)道，慢性感染患者外周血中單個(gè)核細(xì)胞的β2受體密度與血清中可溶性IL-2受體的水平有關(guān)。

（2）多巴胺受體：小鼠和大鼠淋巴細(xì)胞膜有多巴胺受體，其Kd分別為4.8±0.2nM和1.9nM。小鼠B淋巴細(xì)胞上的受體密度為60000個(gè)/細(xì)胞，且多種抗多巴胺藥物均可抑制放射性配基與多巴胺受體的結(jié)合。

（3）ACh受體：以同位素標(biāo)記的M受體可見于小鼠脾淋巴細(xì)胞和非淋巴細(xì)胞上，前者是的Kd為1nM，密度為200個(gè)/細(xì)胞，后者密度為400個(gè)/細(xì)胞。小鼠胸腺和家兔胸腺細(xì)胞的膽堿能受體為N型，可特異地結(jié)合銀環(huán)索毒素，提示胸腺的部分細(xì)胞可能起源于神經(jīng)嵴或神經(jīng)外胚層。骨髓干細(xì)胞膜上的ACh受體參與干細(xì)胞的激活。另外，Jurkat細(xì)胞株具有M3型的ACh受體，M3受體激活后細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度上升，這一效應(yīng)系PLC和IP3所介導(dǎo)的。Jurkat細(xì)胞膜上M3受體的Kd為14.1nM，最大結(jié)合為45370位點(diǎn)/細(xì)胞，所制備細(xì)胞膜也具有這一結(jié)合活性。

（4）5羥色（5-hydroxytryptamie,5-HT）:5-HT既是神經(jīng)遞質(zhì)，又是免疫細(xì)胞如肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的活性分泌物。已發(fā)現(xiàn)激活的人T細(xì)胞膜上有5-Ht 1a受體的分布，此受體的激活可增加胞內(nèi)cAMP嘗濃度。人T淋巴細(xì)胞系Jurkat也表達(dá)5-HT1a受體，其作用可由IP3和Ca2+介導(dǎo)。

（5）組織胺（histamine）受體：人T細(xì)胞有Kd為0.4nM及數(shù)目為35000/細(xì)胞的組織胺受體。CD8+T細(xì)胞上的組胺受體為H2型，其密度約為6000-7000/細(xì)胞，并受白細(xì)胞介素和H2受體拮抗劑西米替丁的調(diào)節(jié)。B細(xì)胞上的組織胺受體亦以H2型居中多。

2.類固醇激素受體

分子生物學(xué)研究工作表明，幾種類固醇激素的胞內(nèi)受體構(gòu)成一受本超家族，包括糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoid ,receptor,GR）、雄激素受體（androgenreceptor,AR）、孕激素受體（progesterone receptor,PR）、鹽皮質(zhì)激素受體（mineralocorticoid,receptor,MR）、甲狀腺激素受體（thyroidhormone receptor,TP）,視黃酸受體（retinoicacid receptor,RAR）及維生素D受體（vitaminD erceptor,VDR）。其中GR、MR、AR和PR均可識(shí)別和結(jié)合DNA分子中一段基因序列，稱之為糖皮質(zhì)激素反應(yīng)原件（glucocorticoid response element,GRE）,其序列為AGAACAnnnTGTTCT由GRE介導(dǎo)可影響靶基因的轉(zhuǎn)錄。

（1）GR：GR廣泛分布于多種淋巴組織及器官，存在于免疫細(xì)胞的胞漿及核內(nèi)。GR在免疫細(xì)胞的表達(dá)有如下特點(diǎn)：①有較大的性別差異，如雌鼠胸細(xì)胞內(nèi)GR濃度低于雄鼠。②抗原刺激及PHA均可上調(diào)GR濃度，而地塞米松則使其下調(diào)。③Ca2+參與對(duì)GR失活速率的調(diào)控。④IL-2及IL-4聯(lián)合應(yīng)用可降低人外周血單個(gè)核細(xì)胞GR對(duì)配基的親和力，并使其增加，此作用可被IFN-γ陰斷。⑤LPS可促進(jìn)GR在小鼠Mφ的表達(dá)。

GR由800多氨基本組成，其序列可分為幾個(gè)功能區(qū)域：①DNA結(jié)合區(qū)，由80氨基酸殘基構(gòu)成，中心部分為兩上鋅指結(jié)構(gòu)，可結(jié)合DNA雙螺旋的大溝（major groove）內(nèi)；②C端為糖皮質(zhì)激素（GC）結(jié)合區(qū)；③N末端有Tau1區(qū)，可在GR與DNA結(jié)合后，以反式激活靶基因的轉(zhuǎn)錄。此外，在GC結(jié)合區(qū)鄰近，也有Taul區(qū)，參與GR在核內(nèi)轉(zhuǎn)位。無(wú)配基存在時(shí)，GR與300kDa的蛋白復(fù)合物結(jié)合而處于無(wú)活性狀態(tài)。此蛋白復(fù)合物由2個(gè)亞意念的90kDa熱休克蛋白（HSP90），59kDa的免疫親和素（immunophilin）及其它抑制性蛋白組成，HSP90結(jié)合于GR的C末端，參與GR的折疊構(gòu)型并防止其自胞漿向核內(nèi)轉(zhuǎn)位。免疫親和素也可結(jié)合CsA、FK506及rapmycin等免疫抑制劑，提示GC的免疫效應(yīng)與其它免疫抑制劑的作用機(jī)制可能類同。

（2）AR：已證實(shí)在大鼠、小鼠的胸腺及雞的法氏囊上皮細(xì)胞內(nèi)有睪酮受體存在。

（3）ER及PR：雌二醇（F2）受體存在于大鼠、小鼠、牛及人的胸腺中，其Kd約為0.2nM，可能定位于胸腺上皮細(xì)胞或網(wǎng)狀細(xì)胞內(nèi)。雞法氏囊也有E2受體。PR則見于大鼠胸腺細(xì)胞內(nèi)。

3.神經(jīng)肽及肽類激素受體

（1）ACTH受體：已知小鼠脾細(xì)胞膜上有高親和力和低親和力兩種ACTH受體，其Kd分別為0.1nM和4.8nM，受體密度為3000/細(xì)胞及5000/細(xì)胞。人外周血單個(gè)核細(xì)胞也有此兩種受體，Kd值分別為0.04M和3.4nM。免疫細(xì)胞上的ACTH受體與腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞膜的ACTH受體性質(zhì)和結(jié)構(gòu)基本相同，其分子量為225kDa，由4條多肽鏈構(gòu)成，分子量分別是83、64、52和22kDa。

（2）GH受體：小鼠及小牛胸腺細(xì)胞，人T細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞均有GH受體分布。胸腺的GH受體密度為10-20000/細(xì)胞，而IM-9淋巴母細(xì)胞系細(xì)胞膜上GH受體的Kd為1.3nM，密度為4000/細(xì)胞。

（3）PRL受體：PRL與GH對(duì)免疫細(xì)胞作用廣泛，故其各自受體亦應(yīng)存在于免疫細(xì)胞膜上。人外周血T及B淋巴細(xì)胞PRL受體Kd=1.66nM，密度為360/細(xì)胞，由E2所致的大鼠淋巴瘤Nb2株細(xì)胞的PRL受體Kd為75pM，每個(gè)細(xì)胞有12000個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。另發(fā)現(xiàn)，環(huán)孢霉素A能增加淋巴樣細(xì)胞對(duì)125I-PRL的結(jié)合。

（4）阿片肽受體：阿片肽受體不同的亞型及非阿片樣受體均存在于免疫細(xì)胞膜上。人外周血淋巴細(xì)胞和血小板可結(jié)合3H-納絡(luò)酮。非阿片肽受體主要與β-內(nèi)啡肽（β-endorphn,β-END)的C端相結(jié)合，參與調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞對(duì)植物血凝素的反應(yīng)。

（5）SP受體：利用放射受體分析、放射自顯影及FACS等技術(shù)已證實(shí)SP特異性受體分布廣泛，如大鼠脾臟富含B細(xì)胞的邊緣區(qū)，小鼠脾臟及腸壁Peyer氏結(jié)中的T和B細(xì)胞，豚鼠腹腔巨噬細(xì)胞等（表10-2）。

表10-2　SP受體在免疫細(xì)胞上的頒布及特性

受體的細(xì)胞來(lái)源放射性配　基親和力解離常數(shù)（Kd）受體密度?。▊€(gè)/細(xì)胞）配體特異識(shí)別部位人外周血T淋巴細(xì)胞3H-SP1.85±0.70*10-77035±2850C-末端人B系IM-9淋巴母細(xì)胞3H-SP0.65±0.19*10-922641±6143C-末端人B系IM-9淋巴母細(xì)胞細(xì)胞膜組分125I-SP0.87±0.80*10-921±3*10-15M/mg蛋白C-末端胞膜蛋白質(zhì)125I-SP0.75±0.33*10-93.7±1.5*10-15M/mg蛋白C-末端小鼠淋巴細(xì)胞（混合）0.68±0.01*10-9N及C末端脾淋巴細(xì)胞125I-SP195(T),190(B)Peyer氏結(jié)淋巴細(xì)胞125I-SP647(T),975(B)大鼠脾臟邊緣區(qū)125I-SP2.4*10-9

注：在速激肽受體中，SP受體為NK-1型，系G蛋白受體家族成員之一。

（6）其它：CD4+T細(xì)胞膜上有與腺苷酸環(huán)化酶相偶聯(lián)的VIP受體。降鈣素受體分布于人外周B細(xì)胞膜上，提示降鈣素不但能調(diào)節(jié)骨骼生理過(guò)程，還可影響免疫功能。同樣，LHRH、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（corticotropin-releasing hormone,CRH）、CGRP、ANP、心房利鈉肽（atrial natriuretic polypeptide,ANP）、血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AⅡ）、VIP、SS等受體也見于免疫組織及免疫細(xì)胞上。

4.褪黑素受體 目前發(fā)現(xiàn)，在雞、鴨等家禽及鵪鶉的胸腺、脾臟、淋巴結(jié)和法氏囊等部位可特異性結(jié)合褪黑素。褪黑素具有脂溶性，可穿透胞膜而作用于胞漿及核內(nèi)受體。